vWF、PAI-1在糖尿病大鼠腎組織的表達(dá)及丹紅注射液、二甲雙胍的干預(yù)研究.pdf

1、目的:糖尿病是一種全身的慢性代謝性疾病，其發(fā)病率逐年增高。糖尿病腎病(DN)是糖尿病最常見和嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥，也是導(dǎo)致終末期腎臟病的一個(gè)重要原因。DN的發(fā)生發(fā)展是多因素綜合作用的結(jié)果，與糖代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞因子、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、血液流變學(xué)等因素密切相關(guān)。血液流變學(xué)改變是糖尿病時(shí)微循環(huán)障礙的主要原因，在DN發(fā)展過(guò)程中起重要作用。血管性假血友病因子(vWF)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)能反映機(jī)體的凝血、纖溶功能，參

2、與DN的發(fā)生、發(fā)展。vWF是血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的標(biāo)志物。vWF水平升高促進(jìn)了血液的高凝狀態(tài)。PAI-1是纖溶系統(tǒng)的主要調(diào)控因子，能夠抑制纖溶活性。丹紅注射液的主要功能為活血化瘀，二甲雙胍是一種被廣泛應(yīng)用的有效安全的降糖藥，同時(shí)具有調(diào)節(jié)血脂，降低血小板聚集、改善血流變的作用。丹紅注射液、二甲雙胍可能能夠延緩DN的進(jìn)展，但其具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。本研究觀察丹紅注射液、二甲雙胍干預(yù)前后糖尿病大鼠血清vWF水平及腎組織中vWF、PAI-1表達(dá)的

3、變化，進(jìn)一步探討DN發(fā)病機(jī)制及丹紅注射液、二甲雙胍的腎臟保護(hù)作用。
　　方法:48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為2組:正常對(duì)照組（A組）10只、實(shí)驗(yàn)組38只。實(shí)驗(yàn)組大鼠均按55mg/kg劑量一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)，72小時(shí)后測(cè)血糖值＞16.7mmol/L，持續(xù)三天，作為糖尿病大鼠模型建立的標(biāo)準(zhǔn)。把實(shí)驗(yàn)組大鼠隨機(jī)分為三組:糖尿病組（B組）14只、丹紅干預(yù)組（C組）12只、二甲雙胍干預(yù)組（D組）12只。C組按2ml/kg·d劑量腹

4、腔注射丹紅注射液，D組給予二甲雙胍300mg/kg·d灌胃給藥，A和B組分別給予腹腔注射相應(yīng)劑量的生理鹽水。干預(yù)為期8周。于第8周末，各組大鼠收集血液、尿液及腎組織標(biāo)本。然后檢測(cè)血糖(BG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24小時(shí)尿白蛋白定量。酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)測(cè)定各組大鼠血清vWF的濃度。腎組織進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色在光鏡觀察腎臟形態(tài)學(xué)變化。用

5、免疫組化的方法檢測(cè)各組大鼠腎臟vWF的表達(dá)，應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)腎組織vWF、PAI-1mRNA的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析、非參數(shù)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、8周后，B組大鼠BG、TC、TG、LDL-C、Scr、BUN、24小時(shí)尿白蛋白定量、腎臟肥大指數(shù)明顯高于A組(P＜0.01)，應(yīng)用丹紅注射液、二

6、甲雙胍干預(yù)8周后，干預(yù)組大鼠TC、TG、LDL-C、Scr、BUN、24小時(shí)尿白蛋白定量、腎臟肥大指數(shù)較B組明顯減低(P＜0.05)，D組BG較B組相比明顯降低(P＜0.01)。
　　2、血清vWF∶B組血清vWF的濃度較A組明顯升高(P＜0.01)，而C組、D組較B組水平有所下降(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、形態(tài)學(xué)檢查:糖尿病大鼠出現(xiàn)病理改變，B組大鼠可見腎小球平均截面積明顯增大，系膜基質(zhì)輕度增多，部分腎小

7、管上皮細(xì)胞萎縮，管腔擴(kuò)張。C組、D組大鼠腎臟病理改變減輕。
　　4、腎組織vWF蛋白的表達(dá):免疫組化結(jié)果提示B組腎組織vWF蛋白表達(dá)明顯高于A組(P＜0.01);C組、D組大鼠腎臟vWF的表達(dá)較B組明顯減少(P＜0.01)，但仍多于A組。
　　5、實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果提示:與A組相比，B組vWF、PAI-1mRNA的表達(dá)明顯增加(P＜0.01)，而C組、D組vWF、PAI-1mRNA表達(dá)較B組有所減少（P＜0.05）。B組

8、、C組、D組大鼠腎組織vWFmRNA相對(duì)表達(dá)量分別是A組的5.09倍、3.45倍、3.19倍。B組、C組、D組大鼠腎組織PAI-1mRNA相對(duì)表達(dá)量分別是A組的4.31倍、2.70倍、2.98倍。
　　結(jié)論:
　　1、實(shí)驗(yàn)性1型糖尿病大鼠血清vWF水平及腎臟vWF、PAI-1表達(dá)增加，提示vWF、PAI-1與糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。
　　2、丹紅注射液、二甲雙胍通過(guò)調(diào)節(jié)血脂、降低尿白蛋白、降低vWF和PAI-1