NAFLD大鼠肝臟基因表達(dá)譜的改變及二甲雙胍的干預(yù)作用.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver diseases,NAFLD)是一種常見(jiàn)的慢性肝病,是引起不明原因轉(zhuǎn)氨酶升高和隱源性肝硬化的主要原因.該實(shí)驗(yàn)即探討了NAFLD發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中肝臟基因的動(dòng)態(tài)改變情況,并觀察二甲雙胍干預(yù)對(duì)肝臟基因表達(dá)的影響,以進(jìn)一步明確其治療機(jī)制.第一部分芯片技術(shù)研究NAFLD大鼠肝臟基因表達(dá)譜的動(dòng)態(tài)變化;目的:了解高脂飲食NAFLD大鼠肝臟基因的異常表達(dá)情況,著重探討代謝、炎癥和纖維

2、化相關(guān)基因的變化.方法:復(fù)制NAFLD大鼠模型,在實(shí)驗(yàn)第4、8、12、16、24周分批處死大鼠,觀察肝臟組織學(xué)改變;并取肝組織進(jìn)行總RNA提取、雙鏈cDNA合成、cRNA轉(zhuǎn)錄和純化,應(yīng)用含有15,650條基因的大鼠U230A芯片進(jìn)行檢測(cè).結(jié)論:高脂飲食NAFLD大鼠肝臟基因隨著時(shí)間的進(jìn)展呈動(dòng)態(tài)性改變,相繼表現(xiàn)為成脂基因、代謝酶基因,炎癥和凋亡相關(guān)基因,以及纖維化相關(guān)基因的表達(dá)上調(diào),導(dǎo)致NAFLD的病理學(xué)發(fā)生相應(yīng)的改變.第二部分成脂相關(guān)基

3、因在NAFLD大鼠肝臟中的表達(dá);目的:探討固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein1c,SREBP-1c)及其靶基因脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、成脂相關(guān)基因adipsin、resistin和瘦素受體(leptin receptor long form,OB-Rb)在高脂飲食NAFLD大鼠肝臟中的表達(dá)及其作用,并分析瘦素及其受體與SRE

4、BP-1c和肝組織學(xué)改變的關(guān)系.方法:RT-PCR檢測(cè)SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin和OB-Rb在肝臟中的表達(dá),ELISA法檢測(cè)血清瘦素的變化情況.結(jié)論:高脂飲食NAFLD大鼠肝臟SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin mRNA的表達(dá)升高,提示NAFLD大鼠肝臟可能發(fā)生成脂性改變.血清瘦素水平上升,而肝細(xì)胞OB-Rb表達(dá)下降,提示NAFLD大鼠存在瘦素抵抗,并可能通過(guò)誘導(dǎo)成脂基因的表達(dá),加

5、重肝臟的異位脂肪沉積.第三部分二甲雙胍對(duì)NAFLD大鼠肝臟成脂基因表達(dá)的影響;目的:探討二甲雙胍對(duì)NAFLD大鼠肝臟成脂基因表達(dá)的影響.方法:雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組.正常組6只,模型組和治療組各12只.治療組在給予高脂飲食的同時(shí),在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第4周起按250mg/kg/d加入二甲雙胍干預(yù),于第24周時(shí)處死.觀察肝組織學(xué)改變,進(jìn)行基因芯片檢測(cè),并觀察肝臟SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin和OB-Rb mRNA的表達(dá)