不同切應(yīng)力條件下體外培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈的蛋白組學(xué)研究.pdf

1、血管重建是高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病共同的發(fā)病基礎(chǔ)和基本的病理過(guò)程。低切應(yīng)力在動(dòng)脈粥樣硬化血管重建發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，然而其分子機(jī)制仍未闡明。開(kāi)展力學(xué)因素作用條件下的心血管蛋白質(zhì)組研究，尋找力學(xué)因素對(duì)心血管作用的藥物靶標(biāo)或生物標(biāo)記物，有助于我們從蛋白質(zhì)水平更全面地了解血管重建的分子機(jī)制，為臨床防治心血管疾病提供新的力學(xué)生物學(xué)依據(jù)。 本文應(yīng)用雙向凝膠電泳(2-DE) 結(jié)合質(zhì)譜分析與生物信息學(xué)分析的蛋白質(zhì)組學(xué)方法，比較了正

2、常切應(yīng)力(15 dyn/cm2) 與低切應(yīng)力(5 dyn/cm2) 條件下體外培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈蛋白表達(dá)的差異；同時(shí)對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)分析篩選出的血管差異表達(dá)蛋白R(shí)ho-GDIα，應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)和蛋白免疫印跡技術(shù)進(jìn)行組織水平的驗(yàn)證；應(yīng)用細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)流動(dòng)腔系統(tǒng)和蛋白免疫印跡技術(shù)，檢測(cè)了正常切應(yīng)力與低切應(yīng)力條件下，大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs) 與內(nèi)皮細(xì)胞(ECs)的Rho-GDIα表達(dá)變化。結(jié)果顯示：①2-DE圖譜中，2倍以上差異表達(dá)

3、的蛋白點(diǎn)有78個(gè)，質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索確定了其中43個(gè)蛋白的身份，大多數(shù)差異蛋白的功能涉及細(xì)胞骨架、信號(hào)傳遞、能量代謝和細(xì)胞外基質(zhì)分子等，其中Rho家族磷酸化的調(diào)節(jié)蛋白R(shí)ho-GDIα在低切應(yīng)力組低表達(dá)；②與正常切應(yīng)力組相比，低切應(yīng)力條件下體外應(yīng)力培養(yǎng)血管組織的Rho-GDIα在RNA和蛋白水平的表達(dá)均下降，與蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果一致；③與正常切應(yīng)力組相比，低切應(yīng)力條件下聯(lián)合培養(yǎng)VSMCs與ECs的Rho-GDIα蛋白表達(dá)均明顯降低，這一