大鼠局灶性腦缺血致脊髓前角運動神經(jīng)元損傷模型的建立及遠志對其的保護作用.pdf

1、缺血性腦損傷即缺血性腦血管疾病(ischemic cerebro vascular disease,ICVD),指顱內(nèi)供應腦部的動脈血管管壁發(fā)生病理改變,使血管管腔狹窄、閉塞、血流停滯,引起相應供血部位的腦組織發(fā)生缺血性壞死,進而出現(xiàn)相應的神經(jīng)功能障礙。ICVD具有發(fā)病率高、致死率高、復發(fā)率高等特點。隨著醫(yī)學水平的提高,雖經(jīng)積極治療后存活率逐漸提高,但50％~70%的幸存者遺留不同程度的學習記憶障礙及運動障礙,嚴重影響患者的生活質(zhì)量,目

2、前已成為威脅人類健康的主要疾病之一。腦組織缺血缺氧時會產(chǎn)生一系列的病理變化,近年來,對于ICVD發(fā)病機制的研究理論已日漸豐富,但腦組織缺血是否引起脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)及其機制國內(nèi)外報道甚少,進一步探討其發(fā)病機制對臨床預防和治療有十分重要的意義。
　　近年來,中藥多靶點治療越來越受到關注。已有研究表明,中藥遠志(Polygala)對癡呆、糖尿病(diabetes mellitus,DM)等動物模型

3、的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)有保護作用,但關于遠志對腦缺血時SCI作用的研究國內(nèi)外報道甚少。
　　本研究采用線栓法建立大鼠大腦中動脈栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型,探討大鼠局灶性腦缺血對脊髓前角運動神經(jīng)元的影響及遠志對其的保護作用,為臨床預防和治療腦缺血致SCI提供實驗基礎和理論依據(jù)。
　　第一部分大鼠局灶性腦缺血致脊髓前角運動

4、神經(jīng)元損傷模型的建立
　　目的:
　　本研究采用線栓法建立大鼠MCAO模型,通過觀察大鼠局灶性腦缺血后不同時間點脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)結構變化和乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AChE)含量的變化,逐步建立大鼠局灶性腦缺血致脊髓前角運動神經(jīng)元損傷的模型。
　　方法:
　　雄性SD大鼠20只,隨機分為4組,均采用線栓法建立MCAO模型,術后大鼠分別存活1W、2W、4W、8W,取脊髓頸膨

5、大。
　　尼氏染色法觀察大鼠脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)結構的變化;亞鐵氰化銅法(Karnovsky-Roots)顯示脊髓前角外側核運動神經(jīng)元AChE含量的變化。
　　結果:
　　1各組大鼠脊髓前角外側核運動神經(jīng)元的形態(tài)結構
　　光鏡下各組大鼠對照側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)結構正常,突起清晰可見,細胞核呈圓形居胞體正中,尼氏體呈虎斑狀。1W組大鼠實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元接近對照側大鼠脊髓前角外側核運動神

6、經(jīng)元。2W組大鼠實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元胞體腫脹,細胞核移位。4W組大鼠實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元著色深淺不一,胞體腫脹,細胞核移位,部分尼氏體溶解。8W組大鼠實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元可見部分細胞核溶解、細胞脫失,胞體數(shù)目減少。
　　2各組大鼠脊髓前角外側核運動神經(jīng)元AChE含量
　　各組大鼠對照側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元呈現(xiàn)清晰的紅棕色顆粒,此為AChE活性處的陽性產(chǎn)物,神經(jīng)元胞體輪廓清晰,細胞核不著色。腦

7、缺血1W組實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元 AChE含量高于對照側(P<0.01)。腦缺血2W組實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元AChE含量開始低于對照側（P<0.01),腦缺血4W組、8W組此變化更為明顯(P<0.01)。
　　結論:
　　1大鼠局灶性腦缺血可導致脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)結構發(fā)生病理變化。
　　2大鼠局灶性腦缺血可導致脊髓前角外側核運動神經(jīng)元 AChE含量發(fā)生變化。
　　3成功建立了大鼠局灶性腦

8、缺血致脊髓前角運動神經(jīng)元損傷模型,且腦缺血時間至少為8周。
　　第二部分遠志對局灶性腦缺血致大鼠脊髓前角運動神經(jīng)元損傷的保護作用
　　目的:
　　本研究采用大腦中動脈線栓法建立大鼠局灶性腦缺血致脊髓前角運動神經(jīng)元損傷模型。通過觀察大鼠局灶性腦缺血后脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)結構的變化、AChE含量的變化,電鏡下觀察脊髓前角外側核運動神經(jīng)元胞體及突觸超微結構的變化,探討遠志對局灶性腦缺血大鼠脊髓前角運動神經(jīng)元的保護作用

9、。
　　方法:
　　雄性SD大鼠15只,隨機分為3組:假手術組、模型組和遠志預防組,每組5只。模型組和遠志預防組均采用線栓法建立MCAO模型,假手術組大鼠僅游離結扎頸外動脈,不將魚線從頸外動脈插入頸內(nèi)動脈阻塞大腦中動脈,其余同模型組和遠志預防組。遠志預防組大鼠在腦缺血模型建立后給予遠志(生藥1.2 g/kg/d)灌胃8周;假手術組及模型組大鼠均給與同體積的生理鹽水(3 ml/kg/d)灌胃8周。
　　尼氏染色法觀察大鼠

10、脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)結構的變化;電鏡下觀察脊髓前角外側核運動神經(jīng)元胞體及突觸超微結構的變化;Karnovsky-Roots顯示脊髓前角外側核運動神經(jīng)元AChE含量的變化。
　　結果:
　　1各組大鼠脊髓前角外側核運動神經(jīng)元的形態(tài)結構
　　光鏡下各組大鼠對照側及假手術組實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)結構正常,突起清晰可見,細胞核呈圓形居胞體正中,尼氏體呈斑塊狀。腦缺血模型組大鼠實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元著

11、色深淺不一,胞體腫脹,尼氏體溶解,部分細胞核溶解、消失,胞體數(shù)目減少。遠志預防組大鼠實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)目均好于模型組。
　　2各組大鼠脊髓前角外側核運動神經(jīng)元胞體及突觸超微結構
　　電鏡下各組大鼠對照側及假手術組實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元胞體及突觸超微結構正常;模型組大鼠實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元胞體染色質(zhì)邊集,核膜模糊、溶解,線粒體腫脹變性、嵴斷裂,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、斷裂、脫顆粒,溶酶體增多。突觸

12、可見電子致密型潰變及電子透明型潰變。遠志預防組實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元胞體及突觸超微結構均好于模型組大鼠實驗側。
　　3各組大鼠脊髓前角外側核運動神經(jīng)元AChE含量
　　各組大鼠對照側及假手術組實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元呈現(xiàn)清晰的紅棕色顆粒,此為AChE活性處的陽性產(chǎn)物,神經(jīng)元胞體輪廓清晰,細胞核不著色。腦缺血模型組實驗側脊髓前角外側核運動神經(jīng)元AChE含量低于對照側(P<0.01)。遠志預防組AChE含量低于對照