支原體在女性下生殖道中的分子流行病學研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文支原體在女性下生殖道中的分子流行病學研究姓名：欒瑞玲申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產科學指導教師：吳元赭20080501摘要本研究應用PCRRFLP技術，建立支原體的16SrDNA克隆文庫進行RFLP分析，對普通女性人群陰道分泌物中的支原體進行詳細分類。研究支原體在普通女性下生殖道中的定植情況與分型。調查人群包括女性健康體檢人群、孕早中期婦女以及婦科門診患者，明確支原體在這一人群中的流行病學情況，為進一步研究支原體與

2、女性下生殖道疾病的關系提供理論依據。研究方法和過程：收集健康體檢女性、孕早中期婦女、以及普通婦科門診患者陰道分泌物190例。研究對象選取標準：研究對象均有性生活史，在兩周內未使用過任何抗生素，取樣三天內沒有陰道沖洗、無陰道用藥及性生活，排除經期女性。研究中收集到的陰道分泌物不經傳統(tǒng)的培養(yǎng)法或是免疫法進行初步篩選，而是直接用PCR法對分泌物進行支原體檢測及分型，避免層層篩選造成的菌種丟失。這種應用PCR方法對陰道分泌物直接進行檢測的方法，

3、目前在國內相關臨床研究中沒有廣泛開展，本研究嘗試應用PCR—RFLP技術，建立支原體的16SrDNA克隆文庫進行RFLP分析，對普通女性人群陰道分泌物中的支原體進行詳細分類。檢索美國GeneBank核酸數據庫中己登錄各種支原體科微生物16SrDNA基因序列，設計了16SrDNA引物對GPO和MGSO，其序列為：GPO3：5’GGGAGCAAACAGGAIvrAGArACCCT3’MGSO：5’TGCACCATCTGTCACTCTGTT_

4、AACCTC3’。支原體陽性樣本可以擴增出約270bp的片段。電泳檢驗270bp有條帶的樣品組的擴增產物用1％的瓊脂糖凝膠電泳回收，將PCR擴增產物分別用AluI和RsaI兩種限制性內切酶消化，根據電泳產生的條帶，比對電子酶切的結果判斷支原體種類。為了驗證結果的正確性，比對已經鑒定的臨床株電泳結果，并根據酶切帶型的不同將轉化子分成不同的RFLP類型，每個RFLP類型中選取一定量的克隆子進行測序。應用Bioedit軟件將測序公司返回原序列