地錦(Parthenocissus tricuspidata)的遺傳轉化及抑菌活性研究.pdf

1、地錦(Parthenocissus tricuspidata)為葡萄科(Vitaceae)地錦屬(Parthenocissus)多年生大型落葉木質藤本植物，集綠化、環(huán)境保護、藥用價值為一體，開發(fā)利用前景非常廣闊。為了進一步有效地利用及增加它的適應性，本論文對地錦的遺傳轉化及其抑菌活性進行了初步研究。
　　 利用根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導對地錦進行遺傳轉化。所轉外源目的基因為干旱應答因子結

2、合蛋白DREB基因，克隆自擬南芥，受干旱應答基因啟動子rd29Bp驅動。將此基因與pCAMBIA2301重組構建得到植物表達載體p2326。p2326攜報告基因p-葡萄糖苷酸酶基因(gus)和選擇基因新霉素磷酸轉移酶基因(nptⅡ)。然后將p2326導入根癌農桿菌EHA105，對地錦愈傷組織及外植體莖段進行轉化。經3-4輪卡那霉素選擇培養(yǎng)后，PCR及GUS組織染色驗證，表明成功獲得了轉基因愈傷組織。
　　 對地錦愈傷組織進行耐鹽

3、及脯氨酸含量測定。結果表明，轉基因愈傷組織與非轉基因愈傷組織相比，對高鹽的耐受力有較大提高。在250 mM NaC1的繼代培養(yǎng)基中，攜DREB基因的愈傷組織能夠存活20 d以上，而對照在10 d后大多數褐化死亡。高鹽脅迫時轉基因材料脯氨酸含量高于對照，并能夠維持較長時間。
　　 研究還發(fā)現，來自室外自然生長的地錦莖、葉，對根癌農桿菌有極強的抑制作用。因此，對地錦的抑菌作用進行初步研究。
　　 對一年中不同時期(分別采于4

4、月、8月、12月)的地錦莖、葉進行抑菌活性初步研究。結果表明，12月份地錦葉片對所選細菌抑制作用最強。然后對其進行分溶劑萃取。分別用極性遞增的有機溶劑依次提取地錦中的有效成分、逐級分離、濃縮干燥，得到石油醚部、乙酸乙酯部、正丁醇部和水部等不同極性溶劑萃取物。選擇革蘭氏陽性菌和陰性菌共5種對得到的各部分粗提物分別做抑菌實驗，表明正丁醇部的抑菌活性最強，水部提取物有一定抑制作用，而石油醚部、乙酸乙酯部沒有表現出明顯抑菌作用。
　　

5、地錦正丁醇提取物對大腸桿菌、枯草桿菌、短小芽孢桿菌、農桿菌及酵母菌的最低抑制濃度(MIC)分別為0.25，0.3，0.25，0.3，1g/mL。其抑菌活性隨著濃度增加而增強，而且抑菌活性具有較好的熱穩(wěn)定性。
　　 研究發(fā)現地錦所產生的抑菌物質不僅對無耐藥性的細菌具有抑制作用，而且還對某些耐藥性細菌具有抑制作用。目前，細菌對抗生素的耐藥性已成為全球關注的問題，尋找新型抗生素已迫在眉捷，地錦抑菌物質的研究為新抗菌藥物的研制開發(fā)提供了