三氧化二砷和槲皮素對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞免疫抑制作用的影響.pdf

1、目的：中藥是我國(guó)獨(dú)具優(yōu)勢(shì)的傳統(tǒng)醫(yī)藥資源，子宮頸癌是嚴(yán)重威脅婦女健康的重大疾病，僅次于乳腺癌的第二個(gè)最常見的惡性腫瘤，目前具有年輕化趨勢(shì)。宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與HPV感染密切相關(guān)。機(jī)體免疫系統(tǒng)能產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答，但是，腫瘤仍能在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行性生長(zhǎng)，這與腫瘤可逃避免疫監(jiān)視密切相關(guān)，其中腫瘤免疫抑制作用是其免疫逃逸機(jī)制的重要方面。研究發(fā)現(xiàn)，有些腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)上清確有免疫抑制作用，而有些抗瘤中藥也確有逆轉(zhuǎn)腫瘤上清免疫抑制的作用。CD4+CD25+

2、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)具有免疫無(wú)能性及免疫抑制性，是腫瘤免疫抑制的重要途徑之一。文獻(xiàn)報(bào)道宮頸癌患者外周血中CD4+CD25+Treg顯著升高，三氧化二砷和槲皮素對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的抗腫瘤的研究已有報(bào)道，但是兩種中藥是否有逆轉(zhuǎn)腫瘤培養(yǎng)上清免疫抑制作用未見報(bào)道，為此，體外研究了三氧化二砷和槲皮素對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清免疫抑制功能的影響，為研究中藥抗瘤新機(jī)制和開辟篩選抗瘤中藥新途徑進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1

3、.各種免疫上清的制備分別制備藥物作用一定時(shí)間后洗去藥物，再培養(yǎng)不同時(shí)間的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清。其中，三氧化二砷和槲皮素作用宮頸癌Hela細(xì)胞48小時(shí)后洗去藥物，加入新鮮培養(yǎng)液，重新調(diào)整細(xì)胞濃度后，再培養(yǎng)48小時(shí)的上清分別稱為As-S，Qu-S，相應(yīng)的以完全培養(yǎng)液代替藥物同步處理所獲的對(duì)照培養(yǎng)上清稱為Control-S。 2.用MTT法檢測(cè)兩種中藥培養(yǎng)上清對(duì)PHA誘導(dǎo)的外周血淋巴細(xì)胞增殖及CTL細(xì)胞毒作用的影響。 3.用流式細(xì)

4、胞術(shù)分析兩種中藥培養(yǎng)上清對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群表型的影響。 4.定量ELISA檢測(cè)兩種中藥培養(yǎng)上清TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五種免疫抑制因子的含量。 5.并對(duì)三氧化二砷和槲皮素下調(diào)宮頸癌Hela細(xì)胞免疫抑制因子分泌與上清免疫抑制功能之間的關(guān)系進(jìn)行分析。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用-x±s表示，兩兩比較用q檢驗(yàn)；相關(guān)分析行直線回歸及直線相關(guān)

5、分析；顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05判定為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果： 1.三氧化二砷作用后的Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)外周血淋巴細(xì)胞免疫功能的影響 1.1三氧化二砷作用后的Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清較未作用的培養(yǎng)上清對(duì)PHA誘導(dǎo)的外周血淋巴細(xì)胞增殖、CTL細(xì)胞毒作用及CD4+CD25-T細(xì)胞的抑制作用均顯著降低，而對(duì)CD4+CD25+T細(xì)胞的抑制作用顯著增強(qiáng)。 1.2三氧化二砷作用后的Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清較

6、未作用的培養(yǎng)上清中TGF-β1、IL-4和IL-10含量顯著降低，而VEGF及IL-6含量無(wú)明顯改變。 1.3其中TGF-β1與抑制PHA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖和CD25+表達(dá)正相關(guān)，與CD4+CD25+T細(xì)胞表達(dá)也成正相關(guān)；IL-4與CD4+CD25-T細(xì)胞表達(dá)及CTL細(xì)胞毒作用抑制正相關(guān)；VEGF與CTL細(xì)胞毒作用抑制亦正相關(guān)。 2.槲皮素作用后的Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)外周血淋巴細(xì)胞免疫功能的影響 2.1槲皮素

7、作用后的Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清較未作用的培養(yǎng)上清對(duì)PHA誘導(dǎo)的外周血淋巴細(xì)胞增殖、CTL細(xì)胞毒作用及CD3+、CD4+、CD25+及CD4+CD25-T細(xì)胞表達(dá)的抑制作用均顯著降低，而對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞CD4+CD25+表達(dá)的抑制明顯增高。 2.2槲皮素作用后的Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-B1、IL-6和IL-10含量明顯降低，而VEGF及IL-4含量無(wú)明顯改變。 2.3相關(guān)分析顯示，槲皮素作用后，Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)

8、人外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的抑制和CD25+的表達(dá)抑制均與TGF-B1含量正相關(guān)；TL細(xì)胞殺傷的抑制分別與VEGF和IL-4表達(dá)正相關(guān)，然而槲皮素作用后Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞CD4+CD25-的表達(dá)抑制與IL-10含量正相關(guān)，CD4+CD25+表達(dá)與5種免疫抑制分子含量無(wú)明顯相關(guān)性。 結(jié)論： 1.宮頸癌Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞的免疫功能具有明顯抑制作用，其有可能是宮頸癌Hela細(xì)胞分泌免疫抑制分子

9、，如TGF-β1和IL-10等，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生成增多也可能參與了腫瘤免疫。 2.三氧化二砷和槲皮素主要通過(guò)調(diào)節(jié)免疫抑制分子TGF-β1和IL-10分泌逆轉(zhuǎn)宮頸癌Hela細(xì)胞的免疫抑制作用，這可能是兩種中藥抗腫瘤作用的機(jī)制之一。 3.三氧化二砷和槲皮素可能通過(guò)下調(diào)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)，恢復(fù)CD4+T細(xì)胞抗腫瘤功能及CTL細(xì)胞殺瘤活性，達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的效果，這可能也是兩種中藥抗腫瘤作用