三氧化二砷逆轉(zhuǎn)宮頸癌Hela細(xì)胞免疫抑制的體外研究.pdf

1、目的:宮頸癌是常見(jiàn)婦科惡性腫瘤之一。傳統(tǒng)手術(shù)及放化療均在一定程度上引起機(jī)體的免疫功能低下,不利于疾病的進(jìn)一步治療。因此,宮頸癌的輔助免疫治療逐漸引起人們的關(guān)注。腫瘤細(xì)胞可抑制免疫功能逃避免疫監(jiān)視,是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。研究能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫抑制的有效藥物,是開(kāi)發(fā)抗腫瘤藥物的新思路。三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)是傳統(tǒng)中藥砒霜的有效成分,近年來(lái)它被證明是一種廣譜抗癌藥物,對(duì)治療急性早幼粒白血病有顯著療效。有關(guān)

2、As2O3抑制細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)研究報(bào)道很多;而對(duì)其影響腫瘤細(xì)胞免疫抑制功能,從免疫抑制角度揭示其抗腫瘤機(jī)理的系統(tǒng)研究,國(guó)內(nèi)外尚少見(jiàn)報(bào)道。本課題旨在原有工作基礎(chǔ)上,試驗(yàn)選用其培養(yǎng)上清確有免疫抑制作用的宮頸癌Hela細(xì)胞株,研究其經(jīng)As2O3作用后再培養(yǎng)的上清對(duì)免疫功能的影響,從逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫抑制的角度揭示As2O3抗腫瘤免疫作用新機(jī)制,為進(jìn)一步探索靶途徑、靶位點(diǎn),開(kāi)發(fā)具有我國(guó)自己特色和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗腫瘤中藥療劑,以及指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用奠定

3、實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和提供理論依據(jù)。
　　 方法:確定Hela細(xì)胞最佳接種濃度及培養(yǎng)時(shí)間后,MTT法篩選對(duì)Hela細(xì)胞無(wú)直接毒性的最高As2O3濃度。制備經(jīng)As2O3作用48h后的培養(yǎng)上清,洗滌去除As2O3,收集連續(xù)兩次以新鮮培液進(jìn)行48h再培養(yǎng)的Hela細(xì)胞上清(分別稱為As-S1、As-S2),以不經(jīng)As2O3作用的相應(yīng)同步培養(yǎng)的Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清作對(duì)照(分別稱為Control-S1、Control-S2)。研究這些上清對(duì)人外周血淋

4、巴細(xì)胞PHA誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化,CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2Rα+、CD4+CD25+、CD3ε-ζ+及CD16+表達(dá)等免疫功能指標(biāo)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)MTT法確定實(shí)驗(yàn)用Hela細(xì)胞接種濃度為2×105/mL,培養(yǎng)時(shí)間為48h;經(jīng)MTT法確定實(shí)驗(yàn)用對(duì)Hela細(xì)胞無(wú)直接毒性作用As2O3最高濃度為0.31mg/L。
　　 2.在以培液代替Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行作用的正常對(duì)照組(Contro

5、l),PHA誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化A值、CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2Rα+、CD4+CD25+、CD3ε-ζ+及CD16+細(xì)胞的百分率分別為0.74±0.11、25.09％±5.84％、86.07％±16.05％、40.73％±12.67％、39.11％±12.83％、38.53％±16.36％、83.33％±16.46％、73.37％±12.75％。與之相比,48h培養(yǎng)的Hela單純腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清(Control-S1)可使所檢

6、測(cè)的這8項(xiàng)免疫功能指標(biāo)明顯受抑,分別為0.44±0.11(P＜0.001)、54.66％±6.21％(P＜0.001)、0.96±0.34％(P＞0.001)、22.2％±4.23％(P＜0.001)、20.92％±3.44％(P＜0.001)、52.82％±7.28％(P＜0.05)、0.74％±0.24％(P＜0.05)、2.15％±0.92％(P＜0.001),抑制率分別為40.7±11.77、25.09％±5.84％、86.07

7、％±16.05％、40.73％±12.67％、39.11％±12.83％、38.53％±16.36％、83.33％±16.46％、73.37％±12.75％。
　　 4.經(jīng)As2O3作用后的Hela腫瘤細(xì)胞:其第一次48h再培養(yǎng)上清(As-S1)與相應(yīng)對(duì)照上清(Control-S1)相比,對(duì)PHA誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化,CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2R+、CD4+CD25+、CD3ε-ζ+及CD16+農(nóng)達(dá)的抑制作用均明顯降低(

8、分別為P＜0.001,P＜0.001,P＜0.001,P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05,P＜0.001,P＜0.05)。其第二次48h再培養(yǎng)上清(As-S2)與As-S1相比,對(duì)PHA誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化,CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2Rα+及CD3ε-ζ+表達(dá)的抑制作用明顯回升(分別為P＜0.05,P＜0.05,P＜0.001,P＜0.05,P＜0.05,P＜0.001),恢復(fù)至相應(yīng)對(duì)照上清Control-S2水平(均P＞

9、0.05);對(duì)CD4+CD25+和CD16+表達(dá)的抑制無(wú)顯著變化(均P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.Hela細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)T細(xì)胞PHA誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化、CD3+、CD4+、IL-2Rα+和CD4+CD25+的表達(dá)抑制率約40％,對(duì)T細(xì)胞CD3ε+ζ+及NK細(xì)胞CD3ε-ζ+、CD16+表達(dá)的抑制率約70％。
　　 2.As2O3作用Hela細(xì)胞后,可使相應(yīng)再培養(yǎng)上清對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞相關(guān)免疫功能指標(biāo)的抑制發(fā)生一