Martentoxin調(diào)制平滑肌型BK-,Ca-通道（α+β1）的藥理機(jī)制研究.pdf

1、α+β1型BK通道作為血管平滑肌細(xì)胞膜上表達(dá)豐度最高的鈣激活鉀通道，相比其它BK通道亞型具有更高的鈣離子敏感性，在平滑肌收縮時(shí)可被胞內(nèi)升高的鈣離子激活，引起K+外流，細(xì)胞超極化，阻止肌細(xì)胞的收縮，并促進(jìn)肌細(xì)胞的舒張，其功能的失調(diào)可誘導(dǎo)慢性肺動(dòng)脈高壓、腦血管痙攣引起的偏頭痛和血管平滑肌的習(xí)慣性收縮等病理反應(yīng)。因此，發(fā)掘和鑒定α+β1型BK通道的高特異性配體和調(diào)制劑，不僅可促進(jìn)平滑肌型BK通道生理/病理功能調(diào)控特征的研究，還對(duì)該通道相關(guān)臨床

2、疾病藥物的研發(fā)具有重要的理論指導(dǎo)參考價(jià)值與實(shí)際運(yùn)用意義。Martentoxin是自東亞鉗蝎(Buthus martensi Karsch，BmK)蝎毒中純化的一個(gè)37肽短鏈毒素，積累的研究資料表明，該毒素可以鈣依賴方式調(diào)控神經(jīng)型BK通道(α+β4)的活性。 本論文利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染、膜片鉗和熒光成像等方法，研究了martentoxin對(duì)平滑肌型BK通道(α+β1)的藥理調(diào)制效應(yīng)及其機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)液中自由鈣濃度分別被控制在70

3、0 nM和25μ M時(shí)，martentoxin可濃度依賴地增強(qiáng)α+β1型BK通道的活性。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)液中缺失鈣離子時(shí)，martentoxin喪失對(duì)α+β1型BK通道的調(diào)制能力；分別700 nM和25μM兩種鈣濃度存在下，martentoxin對(duì)α+β1型BK通道電流的增強(qiáng)比率無(wú)顯著性差異，但在高鈣時(shí)，martentoxin增大α+β1型BK通道電流至峰值所需的最短時(shí)間更少，提示了martentoxin對(duì)α+β1型BK通道的藥理效應(yīng)僅依賴于內(nèi)

4、鈣的有無(wú)，受內(nèi)鈣濃度的高低影響較小，內(nèi)鈣濃度的升高僅能促進(jìn)martentoxin和α+β1型BK通道的快速作用。此外，在相同條件下，martentoxin對(duì)僅由α亞基構(gòu)成的BK通道無(wú)顯著的藥理調(diào)制效應(yīng)，提示martentoxin可能通過與β1亞基直接作用增強(qiáng)α+β1型BK通道的活動(dòng)。另外，恒定胞內(nèi)鈣濃度，經(jīng)不同電壓刺激，martentoxin對(duì)α+β1型BK通道的藥理效應(yīng)無(wú)顯著變化。進(jìn)一步的藥理競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)表明：被martentoxin增強(qiáng)