依達拉奉對大鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的治療作用及其作用機制.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis， RA）是一種以慢性進行性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯娜硇宰陨砻庖卟?，未?jīng)正確治療的RA可反復(fù)遷延多年，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能喪失。其病理的顯著特點是滑膜的血管增生和炎性細胞侵潤，后者則進一步導(dǎo)致滑膜、軟骨乃至軟骨下骨組織的破壞，并可有多系統(tǒng)受累。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因及發(fā)病機制至今尚未完全闡明，細胞因子如TNF-α、IL-1等在RA中的致病作用已在大量的研究中得到證實，目前，對于RA的治療

2、，國內(nèi)外尚無理想藥物。傳統(tǒng)抗風(fēng)濕藥物毒副作用較大，療效差且療程長，而生物制劑價格昂貴，還不能被普遍應(yīng)用。因此，尋找一種新的治療藥物或治療方法尤為重要。最新研究表明自由基在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生及發(fā)展過程中具有相當重要的地位，并可能成為類風(fēng)濕治療的新靶點。依達拉奉（edaravone，MCI-186）是一種新型的自由基清除劑。目前主要應(yīng)用于腦缺血的治療，其通過清除自由基治療RA的研究報道很少。本課題以雞Ⅱ型膠原（chicken collage

3、n type，CCⅡ）誘導(dǎo)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠模型為基礎(chǔ)，從關(guān)節(jié)腫脹度、血漿丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力的變化和核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（CIA）大鼠關(guān)節(jié)滑膜中的表達水平幾個方面，觀察依達拉奉對CIA大鼠

4、的影響，評價其療效，探討依達拉奉與MDA、SOD、NF-κB、TNF-α之間的相關(guān)性及依達拉奉治療CIA的機制和臨床應(yīng)用價值。
　　 方法：（1）選用30只成年雄性Wistar大鼠，隨機分成5組，每組6只，分別命名為Ⅰ～Ⅴ組，其中Ⅰ組為正常對照組，Ⅱ組為模型對照組，Ⅲ組為依達拉奉低劑量組，Ⅳ組為依達拉奉高劑量組，Ⅴ組為氯諾昔康組。Ⅱ～Ⅴ組每只大鼠已給予尾根部皮內(nèi)注射CCⅡ與完全弗氏佐劑（CFA）混合乳劑，成功制作雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)

5、節(jié)炎大鼠模型。（2）于造模致炎后第18天開始Ⅲ～Ⅳ組分別給予依達拉奉3.0 mg/kg2/日、6.0 mg/kg2/日腹腔內(nèi)注射治療，Ⅴ組給予氯諾昔康4mg/kg.d腹腔內(nèi)注射治療。（3）注射后連續(xù)觀察大鼠的一般情況及關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)，測定不同時間點各組大鼠的踝關(guān)節(jié)足墊厚度，并進行關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）評定。（4）各組大鼠于第28天摘取眼球取血，離心備用，測定各組大鼠血漿總SOD活力與MDA含量。（5）采血處死后取大鼠雙膝關(guān)節(jié)滑膜組織，4％多聚

6、甲醛固定，石蠟包埋，行蘇木素-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)滑膜襯里層細胞（LCC）增生，襯里下層炎細胞浸潤及血管翳形成等病理變化。（6）對大鼠滑膜組織進行NF-κB、TNF-α的SP免疫組織化學(xué)染色，采用真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進行定量分析。（7）應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果：（1）關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）：第Ⅱ組大鼠造模后各時間點的AI均高于第1組（P<0.01），造模后18天開始比第15天顯著升高（P<

7、0.01），但高峰出現(xiàn)在造模后21天；Ⅲ～Ⅴ組造模后18天開始比第15天顯著升高（P<0.05），高峰出現(xiàn)在造模后18天，Ⅲ～Ⅴ組間AI無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。（2）足墊厚度：第Ⅱ組大鼠造模后15天右足墊厚度高于第1組（P<0.05），第18～21天達到高峰，之后有所下降（P<0.01）。Ⅲ～Ⅴ組于造模第15天右足墊厚度高于第1組（P<0.05），第18～21天達到腫脹高峰。Ⅲ～Ⅴ組于第21～27天明顯低于第Ⅱ組（P<0.05），

8、但三組之間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。（3）血漿總SOD活力：第Ⅱ～Ⅴ組大鼠造模后第28天血漿總SOD活力低于第1組（P<0.01），Ⅲ～Ⅴ組血漿總SOD活力高于第Ⅱ組（P<0.05），但Ⅲ～Ⅴ組間血漿總SOD活力無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。（4）血漿MDA含量：第Ⅱ～Ⅴ組大鼠造模后第28天血漿MDA含量高于第1組（P<0.01），Ⅲ～Ⅴ組血漿MDA含量低于第Ⅱ組（P<0.01），Ⅲ～Ⅴ組間血漿MDA含量亦無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05

9、）。（5）滑膜NF-κB、TNF-α的積分光密度（IOD）值：造模后第28天Ⅱ～Ⅴ組大鼠NF-κB、TNF-α的IOD值均顯著高于第Ⅰ組，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）；第Ⅲ～Ⅴ組NF-κB、TNF-α的IOD值在造模后28天明顯低于第Ⅱ組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01），但第Ⅲ～Ⅴ組之間NF-κB、TNF-α的IOD值無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。（6）相關(guān)性分析：AI與足墊厚度之間呈直線正相關(guān)；血漿總SOD活力與血漿MDA含量之間呈負

10、相關(guān)，足墊厚度、血漿MDA含量與滑膜組織TNF-＝、NF-κB的IOD值四者之間分別呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論：（1）依達拉奉對CIA大鼠有明顯的抗氧自由基作用及抗炎作用，能夠降低CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)，減輕足墊腫脹程度。（2）依達拉奉能減輕滑膜組織腫脹，減少膝關(guān)節(jié)滑膜襯里層的增生，提示依達拉奉可能能延緩CIA大鼠病程進展。（3）依達拉奉高劑量組與低劑量組對CIA大鼠的治療作用無明顯差異，提示依達拉奉的治療效果可能不存在劑量依賴性。

11、（4）依達拉奉能明顯提高CIA大鼠血漿總SOD活力，降低血漿MDA含量，減少滑膜組織NF-κB、TNF-α的表達。（5）依達拉奉在抑制CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎癥、提高血漿總SOD活力，降低血漿MDA含量，減少滑膜組織NF-κB和TNF-α的表達方面與氯諾昔康無明顯差別，提示依達拉奉對CIA大鼠抗炎作用與氯諾昔康相當，但依達拉奉的遠期療效還有待于進一步觀察。（6）造模后血漿總SOD活力降低，MDA含量增高，滑膜組織NF-κB、TNF-α表達升高