重組TACI-Ig融合蛋白對小鼠膠原性關節(jié)炎的治療作用和部分機制.pdf

1、類風濕關節(jié)炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種涉及T、B淋巴細胞以及多種致病因素的系統(tǒng)性自身免疫病。B淋巴細胞刺激因子(Blymphocytestimulator,BLyS)對B淋巴細胞的成熟和存活起重要作用。大量研究證實,BLyS的過表達與RA等自身免疫病的發(fā)病機理和疾病進程有密切聯(lián)系,RA病人的血清和關節(jié)滑液中都存在高表達的BLyS,且關節(jié)滑液中BLyS的水平高于血清?？缒ぜせ睢⑩}調(diào)和親環(huán)素配體相互作用因子(tr

2、ansmembraneactivatorandcalciummodulatorcyclophilinligandinteractor,TACI)是BLyS的受體之一,被發(fā)現(xiàn)表達于B淋巴細胞和活化的T淋巴細胞。BLyS受體TACI融合蛋白(TACI-immunoglobulin,TACI-Ig)是由TACI受體的胞外部分和人免疫球蛋白IgG的Fc段連接而成,它能競爭性地與BLyS結合,阻斷BLyS所介導的B淋巴細胞激活。本課題在建立DBA

3、/1小鼠膠原性關節(jié)炎(collageninducedarthritis,CIA)模型的基礎上,研究了TACI-Ig對小鼠CIA的治療作用,并對其部分機制進行了探討。
　　目的:
　　初步探索TACI-Ig對小鼠CIA的治療作用及有效劑量,并進一步研究TACI-Ig治療小鼠CIA的作用特點及部分機制。
　　方法:
　　在建立CⅡ誘導的DBA/1小鼠CIA模型基礎上,對CIA小鼠進行關節(jié)炎指數(shù)評分;足爪X線檢查;關節(jié)

4、和脾臟的病理檢查及病理學評分;胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)測定;3H-TdR摻入法檢測B淋巴細胞和T淋巴細胞增殖反應;ELISA法檢測血清中細胞因子BLyS和抗體IgA、IgM的水平;免疫組化法檢測小鼠脾臟中CD20的表達;流式細胞術測定小鼠脾臟CD19+、CD19+IgD+、CD19+CD27+、CD19+IgM+、CD19+CD21+和CD19+CD23+細胞的百分含量;流式細胞術測定小鼠胸腺CD3+CD4+、CD4+CD154+、CD4+C

5、D25+、CD4+CD69+和CD4+CD62L+細胞的百分含量;使用Transwell細胞隔離培養(yǎng)體系共培養(yǎng)CIA小鼠B淋巴細胞和T淋巴細胞后,MTT法檢測B淋巴細胞和T淋巴細胞增殖反應。
　　結果:
　　1.TACI-Ig治療小鼠CIA的有效劑量探索
　　TACI-Ig(3.333、10和30mg/kg,腹腔注射,每周三次,給藥六周)可不同程度地降低CIA小鼠關節(jié)炎指數(shù),改善CIA小鼠足爪放射學改變以及關節(jié)和脾臟的

6、病理變化,降低CIA小鼠增高的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),抑制CIA小鼠增強的B和T淋巴細胞增殖反應,以及降低CIA小鼠血清中高水平的BLyS;TACI-Ig(10mg/kg)和TACI-Ig(30mg/kg)兩組之間無顯著性差異。TACI-Ig(1.105mg/kg)只能降低CIA小鼠血清中的BLyS水平,而TACI-Ig(0.35mg/kg)對上述指標都沒有明顯影響。這表明TACI-Ig對小鼠CIA有治療作用,其最佳劑量范圍主要在3.333

7、-10mg/kg,為進一步研究TACI-Ig對小鼠CIA的治療作用特點和作用機制提供劑量范圍。
　　2.TACI-Ig對小鼠CIA的治療作用特點
　　TACI-Ig(3和9mg/kg,皮下注射,每周三次,給藥六周)可明顯降低CIA小鼠關節(jié)炎指數(shù);降低CIA小鼠關節(jié)滑膜組織增生、細胞浸潤、血管翳形成、炎癥和骨質(zhì)侵蝕評分;降低CIA小鼠脾臟動脈周圍淋巴鞘細胞密度、淋巴濾泡增生、邊緣區(qū)細胞密度和紅髓充血評分以及生發(fā)中心數(shù)量。TAC

8、I-Ig(1mg/kg)只降低關節(jié)滑膜組織增生、細胞浸潤、血管翳形成、炎癥評分,和脾臟動脈周圍淋巴鞘細胞密度評分。各用藥組對CIA小鼠下降的體重無明顯影響。
　　3.TACI-Ig能抑制CIA小鼠B、T淋巴細胞功能,并調(diào)節(jié)CIA小鼠B、T淋巴細胞亞群的變化
　　TACI-Ig(1、3和9mg/kg,皮下注射,每周三次,給藥六周)可以降低CIA小鼠的胸腺指數(shù),降低脾臟CD19+、CD19+IgD+、CD19+IgM+和CD19

9、+CD21+細胞的百分含量,降低胸腺CD4+CD69+和CD4+CD154+的細胞百分含量,升高CD4+CD62L+的細胞百分含量;TACI-Ig(3和9mg/kg)可以降低CIA小鼠的脾臟指數(shù),降低CIA小鼠B、T淋巴細胞增殖反應,降低血清BLyS和IgA水平,抑制CIA小鼠脾臟中CD20的表達,降低CD19+CD23+細胞的百分含量;只有TACI-Ig(9mg/kg)可以降低CIA小鼠的血清IgM水平,降低CD4+CD25+的細胞百

10、分含量;但各劑量組對CD19+CD27+和CD3+CD4+的細胞百分含量沒有明顯影響。TACI-Ig(100μg/ml)體外用藥,能夠抑制CIA小鼠B、T淋巴細胞間的相互促進對方增殖的作用。這表明TACI-Ig治療小鼠CIA的作用機制可能與抑制CIA小鼠B、T淋巴細胞功能,調(diào)節(jié)CIA小鼠B、T淋巴細胞亞群有關。
　　結論:
　　1.TACI-Ig對小鼠CIA有治療作用,其最佳劑量范圍主要在3.333-10mg/kg。