PTEN基因與肽類生長因子胰島素、抗氧化蛋白Cu-ZnSOD關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究胰島素和PTEN在調(diào)控.Akt激酶活性中的作用及相互關(guān)系；初步探討PTEN缺失是否影響Cu/Zn SOD表達水平及其意義；探討PTEN表達水平的差異與胰島素及Cu/Zn SOD的關(guān)系及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展機制中的作用，以更全面的認識抑癌基因PTEN，從而更有效的輔佐臨床腫瘤的靶向治療。 方法：胰島素及NADPH氧化酶抑制劑DPI分別作用于對照小鼠胚胎成纖維細胞PTEN+/+MEFs和PTEN基因敲除的小鼠胚胎成纖維細胞PT

2、EN-/-MEFs，Western Blot檢測Akt激酶磷酸化水平的變化；MTT檢測細胞生長變化；Western Blot及Northem Blot檢測PTEN+/+MEFs及PTEN-/-MEFs內(nèi)Cu/Zn SOD表達水平的差異；單細胞堿性電泳檢測細胞DNA損傷程度；熒光探針標記檢測細胞內(nèi)超氧陰離子水平；MTT檢測H2O2對細胞增殖狀況的影響。 結(jié)果：對照PTEN+/+ MEFs細胞內(nèi)，胰島素使Akt激酶磷酸化水平上調(diào)，D

3、PI處理后，Akt激酶磷酸化回復(fù)基礎(chǔ)水平，在PTEN缺失的PTEN4-/-MEFs細胞內(nèi)未觀察到上述變化；胰島素作用對照PTEN+/+MEFs細胞后細胞增殖加快，DPI作用后細胞增殖減慢，胰島素對其增殖的促進作用消失；各種處理因素對PTEN-/-MEFs細胞增殖影響不大；在PTEN缺失細胞系PTEN-/-MEFs中，Cu/Zn SOD在蛋白及mRNA水平上均表達下調(diào)，細胞內(nèi)超氧陰離子水平明顯增高，空白組及H2O2處理后DNA損傷程度均較

4、PTEN+/+MEFs細胞重，H2O2對細胞增殖的抑制作用減弱。 結(jié)論：肽類生長因子胰島素活化Akt激酶依賴于H2O2的產(chǎn)生和抑癌基因PTEN的存在；PTEN缺失細胞內(nèi)Cu/Zn SOD表達下調(diào)，并由此引起細胞內(nèi)活性氧持續(xù)高水平和氧化損傷的累積以及活性氧對細胞增殖的抑制作用減弱；說明肽類生長因子在PTEN表達陽性的情況下，能通過誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生H2O2活化細胞增殖通路P13K/Akt，加快細胞生長增殖從而促進腫瘤的發(fā)生；反之，Cu/