松花粉的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法的研究.pdf

1、松花粉是我國(guó)傳統(tǒng)食藥兼用的花粉類(lèi)中藥，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和多種生物活性，無(wú)論在臨床應(yīng)用還是保健品開(kāi)發(fā)方面都具有廣闊的前景。針對(duì)松花粉的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，而松花粉的基礎(chǔ)性研究薄弱等問(wèn)題，本課題從資源調(diào)查與鑒定、化學(xué)成分的分離純化與鑒定、有效部位的含量測(cè)定、指標(biāo)成分的含量測(cè)定、指紋圖譜、抗氧化性生物效價(jià)評(píng)價(jià)等方面對(duì)松花粉進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，以期建立松花粉的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，為松花粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。同時(shí)為加速松花粉產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，發(fā)展松花粉食品、

2、保健品、藥品、化妝品和添加劑等提供條件。
　　一.松花粉的鑒別
　　通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)受植物分布數(shù)量以及地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展情況的影響，形成規(guī)模采收、在市場(chǎng)上流通的松花粉的資源植物的主要有:馬尾松Pinus massoniana Lamb、油松Pinus tabulae formis Carr.及云南松pinusyunnanensis Faranch。由于松花粉花粉壁影響其成分的提取和吸收，因此市場(chǎng)上有破壁松花粉與未破壁松花粉之分，并且其

3、價(jià)格存在較大的差異。由于松花粉價(jià)格較高，市場(chǎng)上流通的松花粉摻偽情況也較嚴(yán)重。
　　收集了以上三個(gè)品種的松花粉。對(duì)其進(jìn)行了性狀和顯微的鑒別。松花粉的破壁與否通過(guò)兩種方法都可以鑒別，而通過(guò)顯微鑒別同時(shí)測(cè)定了不同產(chǎn)地的三種松花粉（油松、馬尾松、云南松）的長(zhǎng)徑、短徑及氣囊長(zhǎng)徑，發(fā)現(xiàn)此三種的差異:油松花粉的最小，云南松的花粉直徑最大，馬尾松花粉的則略小于云南松。同時(shí)顯微鑒別也有利于觀察松花粉的摻偽情況。
　　二.松花粉化學(xué)成分的研究<

4、br>　　對(duì)云南松松花粉的三氯甲烷部位的化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒定，得到2種成分:柚皮素C15H12O5及正三十二烷醇CH3(CH2)30CH2(OH)。其中正三十二烷醇是首次在松花粉中分離得到。
　　首次建立了HPLC測(cè)定松花粉中柚皮素與蘆丁的含量的方法，并對(duì)13批松花粉進(jìn)行了含量測(cè)定。結(jié)果表明，松花粉中柚皮素的含量較高，蘆丁的含量較少。柚皮素的平均含量為0.207 mg·g-1，蘆丁的平均含量為0.0014 mg·g-1。不同產(chǎn)地

5、松花粉中柚皮素的含量存在較大差異，蘆丁的含量差異不大。
　　用紫外分光光度法測(cè)定了松花粉總甾醇、總黃酮、總多糖的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同來(lái)源松花粉中總黃酮(0.16～0.75％)和總甾醇(0.98～7.67％)的含量差異較為明顯，而總多糖的含量則相差不大(5.25～6.98％)。
　　三.松花粉抗氧化性的生物效價(jià)評(píng)價(jià)研究
　　生物活性效價(jià)評(píng)價(jià)在中藥有效成分不明確或不確定的情況下，更顯重要。首次采用紫外分光光度法以清除D

6、PPH和羥基自由基的能力為指標(biāo)，對(duì)松花粉的抗氧化性進(jìn)行研究。結(jié)果表明松花粉提取液對(duì)DPPH與羥基自由基均有清除作用，且都呈明顯的量效關(guān)系;松花粉與破壁松花粉清除DPPH的平均IC50分別為14.86g·L-1、12.95 g·L-1，清除羥基自由基的平均IC50分別為20.31 g·L-1、3.45 g·L-1。建議把松花粉的清除自由基的能力作為衡量其質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一，其清除自由基的IC50作為其質(zhì)量控制的指標(biāo)。
　　四，松花粉抗氧

7、化作用與化學(xué)成分的關(guān)聯(lián)
　　把松花粉總黃酮、總甾醇及總多糖的含量與松花粉的清除羥基自由基與DPPH的作用進(jìn)行了線(xiàn)性關(guān)聯(lián)及多元相關(guān)性關(guān)聯(lián)，結(jié)果表明松花粉總黃酮、總甾醇的含量與清除DPPH自由基、羥基自由基的IC50呈負(fù)相關(guān)，并以總黃酮的相關(guān)性最為突出，而總多糖的含量則與其關(guān)聯(lián)性不顯著。推斷黃酮類(lèi)成分是松花粉抗氧化作用的主要有效成分。
　　柚皮素屬于松花粉黃酮類(lèi)成分的一種，并且柚皮素具有良好的清除自由基的作用，通過(guò)關(guān)聯(lián)分析也表明

8、，松花粉的柚皮素含量與其抗氧化活性關(guān)聯(lián)性較大。因此，可以把松花粉中柚皮素的含量作為松花粉質(zhì)量評(píng)價(jià)的一個(gè)量化指標(biāo)。建議松花粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中加入柚皮素的含量測(cè)定。
　　五.松花粉指紋圖譜的研究
　　首次建立了松花粉HPLC指紋圖譜的方法，對(duì)松花粉進(jìn)行了指紋圖譜的研究并進(jìn)行聚類(lèi)分析。結(jié)果表明此條件下不同產(chǎn)地松花粉指紋圖譜相似度95％以上，聚類(lèi)分析結(jié)果表明，馬尾松松花粉和云南松松花粉區(qū)別顯著。松花粉指紋圖譜的藥材HPLC指紋圖譜的建立