松花粉酶解多肽及其抗氧化活性的初步研究.pdf

1、松花粉是一種營養(yǎng)十分豐富的天然資源，近年來對(duì)其中多糖類物質(zhì)以及脂肪酸都進(jìn)行了全面的深入研究，但對(duì)于松花粉中的活性物質(zhì)研究卻鮮有報(bào)道。蛋白質(zhì)是人體生命的最重要的基本物質(zhì)，多肽則是蛋白質(zhì)鏈的分解產(chǎn)物，具有生物活性的多肽片段在人體內(nèi)具有多種重要功能，比如抗氧化、降血壓、抗疲勞、抑制腫瘤、促進(jìn)各種有利于人體的微量元素被吸收，因此，活性多肽的制備成為現(xiàn)在生物工程研究領(lǐng)域的熱門。本課題以實(shí)驗(yàn)室自制的云南松花粉粗提蛋白為原料，利用堿性蛋白酶對(duì)云南松花

2、粉粗提蛋白進(jìn)行水解，并對(duì)其酶解條件進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)得到的酶解多肽進(jìn)行超濾純化，并在化學(xué)體系及細(xì)胞體系下進(jìn)行抗氧化的初步研究，為進(jìn)一步研究松花粉蛋白質(zhì)奠定基礎(chǔ)。結(jié)果如下:
　　1.選用堿性蛋白酶酶解松花粉粗提蛋白，以羥自由基清除率和水解度為測(cè)定指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化酶解條件，確定抗氧化肽的最佳酶解條件為:pH=9.0、溫度為50℃、底物濃度為3％、酶濃度為4000U/g，酶解時(shí)間為2小時(shí)，在此條件下羥自由基清除率可以達(dá)到67

3、.6％。
　　2.云南松花粉酶解多肽(PHPP)在體外的抗氧化研究，在PHPP濃度為7。5mg/mL時(shí)對(duì)超氧陰離子自由基清除率可達(dá)到64.45％，在濃度為30mg/mL時(shí)對(duì)羥自由基的清除率達(dá)到72.99％，在濃度為3mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除率為42.48％。
　　3.離心超濾法對(duì)酶解多肽(PHPP)純化濃縮，得到的酶解多肽純化組分簡稱為PPHPP。對(duì)PPHPP進(jìn)行了全面的抗氧化研究，在其濃度為7。5mg/mL時(shí)對(duì)超

4、氧陰離子自由基清除率可達(dá)到92.48％，在濃度為30mg/mL時(shí)對(duì)羥自由基的清除率達(dá)到80.80％，在濃度為3mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除率為70.83％，與超濾前 PHPP相比，清除率均有不同程度的提高，說明離心超濾法對(duì)于提純蛋白、去除雜質(zhì)、增強(qiáng)酶解多肽活性發(fā)揮了很大的作用。
　　4.MTT法檢測(cè) PPHPP對(duì)過氧化氫損傷的H9C2心肌細(xì)胞株的保護(hù)作用，結(jié)果表明，加入 PPHPP共孵后再進(jìn)行過氧化氫損傷的樣品組，其 OD值

5、較于損傷模型組有不同程度的提高，且終濃度為50、100、500μg/mL的PPHPP組分對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用明顯，其 OD值與模型組相比為極顯著差異(P＜0.01)。
　　5.用SOD、MDA檢測(cè)試劑盒測(cè)定 H2O2模型組及加入 PPHPP后的心肌細(xì)胞損傷組的SOD和MDA值，模型組中SOD的活力較空白組顯著降低(P＜0.01)，過氧化物產(chǎn)物MDA的含量顯著升高(P＜0.01)，但是在PPHPP加樣組中，SOD的活力相對(duì)于模型組顯