松花粉多糖的提取、純化、硫酸酯化及活性研究.pdf

1、研究發(fā)現多糖具有增進免疫、抗腫瘤、抗病毒、抗感染、抗衰老、抗凝血、降血脂、降血糖等功能,已應用于臨床的多糖有香菇多糖、裂褶多糖、云芝多糖等.近年來花粉多糖已經被人們開始注意,但關于松花粉多糖的研究國內外報道不多.松花粉具有增強免疫等多種生物功能,其中馬尾松花粉應用最為廣泛.闡明松花粉具體功效成分對于深層次開發(fā)松花粉具有重要意義,所以本實驗對馬尾松花粉多糖及活性進行了研究. 實驗具體分為以下四個部分: 一、馬尾松花粉多糖的

2、提取與酯化改性:采用熱水浸提法提取,40﹪、60﹪、80﹪乙醇分級沉淀,取60﹪分級多糖硫酸酯化法改性.總多糖提取得率為3.256±0.230﹪;酯化60﹪多糖改性得率為150.6﹪. 二、馬尾松花粉多糖的理化性質測定及純化:定性和定量分析樣品含糖量;HPLC分析單糖組分;凝膠層析各級分多糖,并使用核磁共振法對層析所得多糖樣品進行初步結構分析.紫外光譜顯示多糖無明顯核酸蛋白雜質;紅外光譜表明多糖主要具有糖類特征吸收峰,酯化60﹪

3、多糖具有硫酯基團特征吸收峰.60﹪多糖校正含糖量為83.24﹪,排除硫酸基影響,基本都是多糖組分,酯化60﹪多糖硫酸基取代度為1.471;HPLC分析單糖組分得40﹪多糖主要含有葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖,60﹪松花粉多糖主要含有阿拉伯糖和半乳糖,80﹪多糖主要含有半乳糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和甘露糖.40﹪多糖純化得到6mg樣品,核磁檢測單糖組分仍不單一. 三、馬尾松花粉多糖的體內抗腫瘤研究及安全性初步分析:選取得率最高的60﹪

4、多糖和酯化60﹪多糖作體內S180肉瘤實驗,并對酯化60﹪多糖進行了經口和腹腔注射安全性分析.實驗證明60﹪多糖最大抑瘤率為43.30﹪.毒副作用小,且具有促進免疫活性的功能.酯化60﹪多糖最大抑瘤率為693.27﹪,對S180荷瘤小鼠存活時間的延長率為60.05﹪,酯化改性后大大提高了多糖的抗腫瘤活性.體內免疫實驗表明,酯化60﹪多糖促進NK細胞活性,促進率為81.89﹪:抑制IL-1β,抑制率為58.02﹪;促進IL-4,促進率為4

5、9.85﹪,說明調節(jié)免疫是其抑制腫瘤的機制之一.高劑量酯化60﹪多糖腹腔注射有毒性作用,分析其機制可能是影響肌肉收縮. 四、馬尾松花粉多糖對體外培養(yǎng)癌細胞和免疫細胞的作用:酯化60﹪多糖對HepG2、BGC.823、A549三種癌細胞有不同程度的直接抑制作用(非凋亡途徑),其中對HepG2肝癌細胞的抑制率最高,為39.90﹪:對免疫細胞增殖或吞噬有很強的促進作用,其中對B、T淋巴細胞的促增殖率分別為221.4﹪,155.3﹪,對

6、巨噬細胞吞噬促進率為53.44﹪,說明其通過增強免疫和殺傷癌細胞抑癌.60﹪多糖主要通過增強免疫抑癌. 五、本實驗首次從生理角度上發(fā)現了酯化多糖對哺乳動物腸道平滑肌收縮有抑制作用;60﹪多糖和酯化60﹪多糖對蟾蜍心肌收縮幅度主要有增強作用,對收縮頻率有抑制作用. 本實驗表明松花粉酯化60﹪多糖具有作為一種新抗癌藥物開發(fā)的潛能,且可在治療肌肉組織相關疾病方面做探索研究.酯化60﹪多糖和未酯化松花粉多糖都具有增強免疫的功能,