庫普弗細(xì)胞的藥物、毒物及其它化學(xué)物反應(yīng)相關(guān)基因與大鼠肝再生的相關(guān)性研究.pdf

1、庫普弗細(xì)胞(Kupffer cells，KC)是肝內(nèi)固有的巨噬細(xì)胞，承擔(dān)著多種重要功能。在肝再生中，庫普弗細(xì)胞的形態(tài)及生理生化活動變化很大，其在肝再生中的作用很值得研究。 為了探尋庫普弗細(xì)胞的藥物、毒物及其它化學(xué)物反應(yīng)相關(guān)基因與大鼠肝再生的相關(guān)性，本研究按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除模型，用門靜脈兩步灌流法分散肝臟細(xì)胞，用Percoll梯度離心和免疫磁珠分選法分離庫普弗細(xì)胞，用免疫化學(xué)方法對其進(jìn)行鑒定，用蛋白免疫印跡

2、方法檢測庫普弗細(xì)胞的標(biāo)志蛋白溶菌酶(lysozyme，LYZ)和外胚層發(fā)育不良抗原-2(ectodermal dysplasia2，ED2)，用熒光定量PCR測定上述兩者的mRNA含量。結(jié)果顯示，分離的庫普弗細(xì)胞中，溶菌酶和外胚層發(fā)育不良抗原-2陽性細(xì)胞占96％以上：部分肝切除后各恢復(fù)時間點(diǎn)庫普弗細(xì)胞的上述蛋白含量穩(wěn)定，相應(yīng)的mRNA含量亦穩(wěn)定。 本研究用搜索網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫和查閱相關(guān)學(xué)術(shù)論文等方法獲得對藥物、毒物及其它化學(xué)物的反應(yīng)基

3、因及其參與的生理生化活動，用大鼠2302.0全基因組表達(dá)譜芯片檢測了大鼠部分肝切除(partial hepatectomy，PH)組與手術(shù)對照(operation control，OC)組在部分肝切除后恢復(fù)0、2、6、12、24、30、36、72、120、168h等10個時點(diǎn)的庫普弗細(xì)胞的基因表達(dá)情況，用系統(tǒng)生物學(xué)方法分析了它們的活動和作用。初步證實(shí)，庫普弗細(xì)胞在部分肝切除后迅速激活，并合成腫瘤壞死因子、肝細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、一

4、氧化氮、轉(zhuǎn)化生長因子等多種細(xì)胞因子。除導(dǎo)致自身形態(tài)、功能發(fā)生改變外，還直接影響鄰近的多種細(xì)胞，參與肝再生啟動和進(jìn)展。 研究表明，庫普弗細(xì)胞的藥物、毒物及其它化學(xué)物反應(yīng)相關(guān)基因中共137個與肝再生相關(guān)，涉及細(xì)胞代謝、增殖、分化、免疫等多種生理活動：在肝再生啟動(PH后2-6h)、進(jìn)展(PH后6-72h)和終止(PH后72-168h)等三個階段，起始表達(dá)的基因數(shù)分別為：69，48和16，總表達(dá)的基因數(shù)分別為：69，106和83，表明

5、相關(guān)基因主要在肝再生啟動階段起始表達(dá)，在不同階段發(fā)揮作用，并貫穿于整個肝再生；它們中55％的基因表達(dá)增強(qiáng)，45％的基因表達(dá)減弱，表明肝再生中庫普弗細(xì)胞的多數(shù)藥物、毒物及其它化學(xué)物反應(yīng)基因表達(dá)增強(qiáng)，少數(shù)基因表達(dá)降低；它們的上調(diào)范圍為對照的3-76.66倍，下調(diào)范圍為對照的3-133.46倍，表達(dá)模式分為13種，表明肝再生中庫普弗細(xì)胞的生理生化活動多樣、復(fù)雜。 根據(jù)上述基因在肝再生中的表達(dá)變化推測，部分肝切除后庫普弗細(xì)胞迅速激活，并