藥物代謝酶與抗結(jié)核藥物誘發(fā)肝損傷的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的
　　據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）公布的數(shù)據(jù)顯示，2016年全球約有20億人曾感染結(jié)核病，造成180萬(wàn)患者死亡。而在中國(guó)人群中每年單新發(fā)的結(jié)核患者就多達(dá)90萬(wàn)。結(jié)核病的發(fā)病率和致死率相對(duì)較高。目前對(duì)結(jié)核病的治療主要是化療，以異煙肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇聯(lián)合用藥為主。但在長(zhǎng)期的化療過(guò)程中，極易產(chǎn)生肝損傷、皮膚反應(yīng)、胃腸道反應(yīng)和神經(jīng)失調(diào)等不良反應(yīng)，其中，肝損傷會(huì)顯著影響治療效果并引起耐藥。
　　抗結(jié)核藥物引起肝損傷的

2、發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。代謝學(xué)機(jī)制認(rèn)為異煙肼的代謝產(chǎn)物肼和乙酰肼在細(xì)胞蓄積，誘導(dǎo)產(chǎn)生過(guò)多的ROS和含N的活性毒性代謝產(chǎn)物而導(dǎo)致肝損傷。遺傳學(xué)機(jī)制認(rèn)為NAT2、GST、CYP2E1、HLA基因型與肝損傷的發(fā)生有一定的相關(guān)性。同時(shí)，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)藥物性肝損傷的發(fā)生具有延遲性，劑量與肝損傷發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)不相關(guān)，再次給藥刺激時(shí)機(jī)體會(huì)迅速發(fā)生藥物性肝損傷，而在肝損傷發(fā)生的同時(shí)，患者會(huì)伴隨有發(fā)熱、皮疹、狼瘡樣綜合癥等免疫學(xué)相關(guān)癥狀的發(fā)生，因此認(rèn)為免疫機(jī)制也能導(dǎo)致肝

3、損傷的發(fā)生。
　　本研究首先分析異煙肼和利福平聯(lián)合用藥出現(xiàn)肝損傷的結(jié)核患者，發(fā)生肝損傷相關(guān)癥狀的情況及其與肝損傷程度的關(guān)系，同時(shí)從遺傳學(xué)角度探討藥物代謝酶 CYP2E1和 NAT2基因多態(tài)性對(duì)肝損傷的發(fā)生和肝損傷程度的影響，并進(jìn)一步從免疫學(xué)方面考察肝損傷是否與抗CYP3A4、CYP2E1抗體的產(chǎn)生有關(guān)，為免疫機(jī)制提供新的證據(jù)。
　　方法
　　1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象：本研究所用人血液標(biāo)本均取自于河南省傳染病醫(yī)院的患者。所有患者均簽

4、署了知情同意書，該研究方案在實(shí)施前就已獲得鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)、河南省傳染病醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。
　　2.臨床病例分析：分析河南省傳染病醫(yī)院2016年-2017年聯(lián)合服用異煙肼和利福平的結(jié)核病患者發(fā)生肝損傷相關(guān)癥狀的情況及其與肝損傷程度的關(guān)系。
　　3.基因組DNA提取及基因型分析：收集接受抗結(jié)核治療產(chǎn)生肝損傷的患者的血樣，共64例，其中，輕度肝損害者42例、中度肝損害者18例、重度肝損害者4例。經(jīng)提取基因組DNA，

5、進(jìn)行測(cè)序，將結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。
　　4.肝損傷患者血清中抗CYP3A4、CYP2E1的抗體測(cè)定：收集接受抗結(jié)核治療的患者的血樣，共16例用藥產(chǎn)生輕度肝損傷的患者，8例用藥產(chǎn)生中度肝損傷的患者，2例用藥產(chǎn)生重度肝損傷的患者。采用Western blot方法測(cè)定各血樣中是否含有抗 CYP3A4、CYP2E1的抗體；利用 ELISA方法檢測(cè)各血樣中抗CYP3A4、CYP2E1的抗體的相對(duì)表達(dá)。
　　結(jié)果
　　

6、1．結(jié)核病患者肝損傷相關(guān)癥狀的發(fā)生情況及其與肝損傷程度的關(guān)系
　　本組資料中，共有65例肝損傷的結(jié)核患者，男性44例，女性21例。肝損傷多發(fā)生在用藥后2周以后，飲酒和吸煙不會(huì)加重患者的肝功能。而在65例有肝損傷患者中，有36例（55.38％）的患者會(huì)發(fā)生肝損傷的上述相關(guān)癥狀，其中，食欲不振的發(fā)生率最高，其次是乏力、惡心、發(fā)熱、腹脹、皮疹和皮膚瘙癢、嘔吐。而當(dāng)肝損傷患者發(fā)熱、乏力、惡心、食欲不振時(shí)，發(fā)生中重度肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)升高，表明發(fā)

7、熱、乏力、惡心、食欲不振可能是中重度肝損傷的預(yù)測(cè)指標(biāo)。
　　2．肝損傷組與耐受組結(jié)核患者的 CYP2E1、NAT2基因多態(tài)性與肝損傷發(fā)生及肝損傷程度之間的關(guān)系
　　本組實(shí)驗(yàn)中，CYP2E1 C1/C1基因型發(fā)生肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)值為1.478（P＞0.05），不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。發(fā)生中重度肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)值為0.961（p＞0.05），不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　以NAT2快乙?；蜑閷?duì)照，NAT2中、慢乙酰化型發(fā)生肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)值分別

8、為0.862和1.075。而慢乙?；椭?，NAT2*5/7發(fā)生肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)值為5.304（p＞0.05），不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而NAT2*4/7、NAT2*5/7發(fā)生中重度肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)值分別為2.235、2.050（p＞0.05），不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3．抗CYP3A4、CYP2E1的抗體的表達(dá)量與肝損傷程度的相關(guān)性
　　Western Blot實(shí)驗(yàn)表明中重度肝損傷患者的血清中存在抗CYP3A4、CYP2E1的抗體。

9、>　　ELISA實(shí)驗(yàn)表明中度和重度肝損傷患者血清中抗CYP3A4、CYP2E1抗體與輕度肝損傷患者血清中抗 CYP3A4、CYP2E1抗體的表達(dá)存在顯著差異（p＜0.001）。
　　結(jié)論
　　1．約有55.38%的肝損傷的結(jié)核患者會(huì)發(fā)生肝損傷相關(guān)癥狀，當(dāng)肝損傷患者發(fā)熱、乏力、惡心、食欲不振時(shí)，提示發(fā)生中重度肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)升高。
　　2．從遺傳學(xué)角度發(fā)現(xiàn)CYP2E1和NAT2的基因多態(tài)性在肝損傷的發(fā)生及損傷程度中沒(méi)有影響。