組蛋白脫乙酰基酶抑制劑苯丁酸鈉誘導(dǎo)人類白血病細(xì)胞系細(xì)胞周期阻滯和分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、第一部分：組蛋白脫乙酰基酶抑制劑苯丁酸鈉誘導(dǎo)人類白血病細(xì)胞系細(xì)胞周期阻滯的研究 組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑是一種廣譜的抗腫瘤藥物，它主要通過(guò)提高組蛋白的乙?；潭?，改變腫瘤的基因表達(dá)譜達(dá)到抗腫瘤效果。HDAC抑制劑可以誘導(dǎo)包括U937在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞分化。已有的研究顯示，HDAC抑制劑引起細(xì)胞周期阻滯主要是通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子SP1上調(diào)p21WAF1/CIP1的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。 在課題的第一部分，

2、我們主要研究HDAC抑制劑對(duì)帶有AML1-ETO和PML-RARα的白血病細(xì)胞系Kasumi-1和NB4細(xì)胞周期的作用，及可能的分子機(jī)制。 研究表明，與其它的HDAC抑制劑相似，PB可以通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子SP1上調(diào)p21WAF1/CIP1的表達(dá)，抑制白血病細(xì)胞系的細(xì)胞周期，并且這種作用具有時(shí)間和劑量依賴關(guān)系。 HDAC抑制劑同樣可以抑制Kasumi-1和NB4兩種白血病細(xì)胞的細(xì)胞周期，這種作用可能主要是通過(guò)上調(diào)p21WAF1/C

3、IP1的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，可能并不是通過(guò)逆轉(zhuǎn)AML1-ETO和PML-RARα的異常功能實(shí)現(xiàn)的。 第二部分：組蛋白脫乙?；敢种苿┍蕉∷徕c和AML1-ETO對(duì)p21WAF1/CIP1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究研究顯示，AML1-ETO一方面可以通過(guò)阻斷細(xì)胞分化，促進(jìn)白血病的發(fā)生。另一方面，它也抑制細(xì)胞周期、抑制增殖，這不利于白血病的發(fā)生。AML1-ETO白血病發(fā)生過(guò)程中，需要獲得突變，克服這種增殖抑制。認(rèn)識(shí)AML1-ETO抑制細(xì)胞周期的分子有助

4、于發(fā)現(xiàn)對(duì)該型白血病特異有效的治療方法。目前研究認(rèn)為AML1-ETO抑制細(xì)胞周期主要是通過(guò)上調(diào)p21WAF1/CIP1和p27KIP，抑制周期素D3和CDK4，AML1-ETO在K562表達(dá)后，可以上調(diào)p21WAF1/CIP1的表達(dá)。 我們首先研究了AML1-ETO和AML1的不同剪接體對(duì)p21WAF1/CIP1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。研究發(fā)現(xiàn)，在CV-1細(xì)胞系，AML1-ETO和AML1b都抑制p21WAF1/CIP1的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄

5、活性，呈劑量依賴關(guān)系，AML1-ETO的轉(zhuǎn)錄抑制活性比AML1b明顯。結(jié)合以往的文獻(xiàn)，AML1-ETO與AML1b相似，對(duì)p21WAF1/CIP1的調(diào)控作用可能與細(xì)胞系的有關(guān)。AML1a對(duì)p21WAF1/CIP1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性可能也具有一定的轉(zhuǎn)錄抑制活性。使用含有部分p21WAF1/CIP1啟動(dòng)子序列的報(bào)告質(zhì)粒研究發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO和AML1的不同剪接體對(duì)p21WAF1/CIP1的轉(zhuǎn)錄抑制作用，主要是通過(guò)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-211～-

6、2320bp的序列，對(duì)含有SP1結(jié)合位點(diǎn)的序列影響并不明顯，這與以往AML1b調(diào)控p21WAF1/CIP1的研究相一致。 在此基礎(chǔ)上，我們研究AML1-ETO和PB同時(shí)存在的條件下p21WAF1/CIP1轉(zhuǎn)錄的變化，研究發(fā)現(xiàn)AML1-ETO可以抑制PB對(duì)p21WAF1/CIP1啟動(dòng)子活性的上調(diào)作用，而AML1b并不具有這種作用。AML1a只含有RUNT結(jié)構(gòu)域，相當(dāng)于AML1-ETO中的AML1部分，全長(zhǎng)的ETO相當(dāng)于AML1-E

7、TO中的ETO部分。AML1a和ETO并不具有這種抑制作用，因此，AML1-ETO的這種抑制作用要依賴于其融合蛋白的完整性。研究發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO抑制PB對(duì)p21WAF1/CIP1的上調(diào)，主要是通過(guò)p21WAF1/CIP1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游101bp的序列介導(dǎo)的，提示這主要是通過(guò)影響轉(zhuǎn)錄因子SP1實(shí)現(xiàn)的。為了證實(shí)這一點(diǎn)，我們選擇了SV40病毒基因啟動(dòng)子，PB也可以通過(guò)SP1上調(diào)它的啟動(dòng)子活性。研究發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO同樣可以抑

8、制PB對(duì)SV40基因啟動(dòng)子活性的上調(diào)作用，這證實(shí)了這種抑制作用是通過(guò)影響SP1轉(zhuǎn)錄因子實(shí)現(xiàn)的。 業(yè)已證實(shí)，AML1-ETO對(duì)AML1b具有負(fù)顯性作用，過(guò)量的AML1b可能會(huì)逆轉(zhuǎn)AML1-ETO的轉(zhuǎn)錄抑制作用。為了證實(shí)這一點(diǎn)，我們研究了AML1b對(duì)AML1-ETO這種抑制的逆轉(zhuǎn)作用，研究發(fā)現(xiàn)AML1b和AML1a可以競(jìng)爭(zhēng)性的逆轉(zhuǎn)AML1-ETO的抑制作用。Kasumi-1細(xì)胞經(jīng)PB處理后，p21WAF1/CIP1的表達(dá)仍然上調(diào)，而沒(méi)