骨橋蛋白通過(guò)促進(jìn)p47phox蛋白質(zhì)的表達(dá)提高肝臟kupffer細(xì)胞清除細(xì)菌能力的機(jī)制研究.pdf

1、骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種由多種組織及細(xì)胞分泌的磷酸化糖蛋白，可介導(dǎo)巨噬細(xì)胞的遷移，激活，吞噬及細(xì)胞因子的釋放等。但是該蛋白在巨噬細(xì)胞清除病原微生物過(guò)程中所發(fā)揮的作用及機(jī)制還不甚明了。利用Propionibacterium acnes(P.acnes)誘導(dǎo)的以巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)形成局部肉芽腫為明顯特征的小鼠肝臟肉芽腫模型為研究基礎(chǔ)，本研究引入OPN基因敲除小鼠，來(lái)研究該蛋白在巨噬細(xì)胞清除病原微生物過(guò)程中的作用及進(jìn)行后續(xù)機(jī)

2、制探討。在上述模型中，我們發(fā)現(xiàn)OPN基因敲除小鼠的肝臟內(nèi)所形成的肉芽腫數(shù)量與野生型小鼠肝臟內(nèi)肉芽腫形成數(shù)量相比明顯增多并伴隨著較高的炎癥反應(yīng)性。后續(xù)研究結(jié)果揭示OPN并未影響到免疫細(xì)胞的遷移及凋亡環(huán)節(jié)，提示OPN在機(jī)體感知病原微生物的能力上沒(méi)有缺陷。隨后分離肝臟kupffer細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)OPN基因缺失的kupffer細(xì)胞清除P.acnes的能力明顯降低，該清除能力的降低主要是由于OPN基因缺失的kupffer細(xì)胞經(jīng)P.ac

3、nes刺激后產(chǎn)生具有清除胞內(nèi)細(xì)菌能力的活性氧(ROS)明顯降低。后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明OPN基因缺失的kupffer細(xì)胞其ROS產(chǎn)生降低主要是由于產(chǎn)生ROS的NADPH復(fù)合酶中p47phox蛋白質(zhì)的表達(dá)障礙，外源給予重組鼠源OPN分子可彌補(bǔ)由于OPN缺失造成的該蛋白表達(dá)下降。隨后利用抗β3中和性抗體阻斷該OPN受體后，p47phox蛋白表達(dá)下降，而抗CD44抗體則對(duì)該蛋白表達(dá)沒(méi)有影響，提示OPN主要是通過(guò)與其整合素β3受體結(jié)合進(jìn)而促進(jìn)p

4、47phox的蛋白質(zhì)表達(dá)。最后，利用PI3K及ERK信號(hào)通路抑制劑阻斷整合素β3下游的信號(hào)通路后可以明顯觀察到由于兩條信號(hào)通路的阻斷造成的p47phox蛋白質(zhì)表達(dá)障礙及由此引起的ROS產(chǎn)生下降。綜上所述，我們的研究結(jié)果提示OPN在提高kupffer細(xì)胞清除細(xì)菌能力上發(fā)揮非常重要的作用，該作用主要是通過(guò)其與整合素受體αvβ3結(jié)合及激活該受體下游的PI3K及ERK介導(dǎo)的信號(hào)通路來(lái)上調(diào)p47phox蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)而提高ROS來(lái)完成的。我們提供