PKC-,γ-參與異氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠海馬腦片缺氧無(wú)糖損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:應(yīng)用離體大鼠海馬腦片電生理記錄技術(shù)，觀察異氟烷預(yù)處理在缺氧過(guò)程中和復(fù)氧后對(duì)海馬腦片突觸后誘發(fā)群峰電位變化以及PKCγ表達(dá)的影響，探討異氟烷預(yù)處理對(duì)腦組織缺氧損傷的保護(hù)作用以及與PKCγ亞型的關(guān)系。 方法:大鼠乙醚麻醉后迅速斷頭取腦，低溫分離海馬，并沿矢狀面將其切成0.4mm厚的腦片，放入人工腦脊液中孵育備用，人工腦脊液中持續(xù)通入混合氣體95％O2和5％CO2。實(shí)驗(yàn)分為缺氧對(duì)照組(CON)、Bisindolylmaleimi

2、de Ⅰ(PKCγ抑制劑)組(BIS)、異氟烷預(yù)處理組(ISO)和異氟烷加Bisindolylmaleimide Ⅰ組(IS0+BIS)。平衡灌注后，雙脈沖方波刺激海馬CA3區(qū)Schaffer側(cè)支，記錄海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞誘發(fā)的群峰電位(population spike，PS)，其幅度作為基礎(chǔ)值，所有取得基礎(chǔ)值的腦片分別按上述分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用95％N2和5％CO2混合氣通入無(wú)糖人工腦脊液灌注腦片，實(shí)施缺氧無(wú)糖(ODG)，時(shí)間為14 mi

3、n。更換正常人工腦脊液并通入95％O2和5％CO2混合氣，實(shí)施復(fù)氧，時(shí)間60min。2％異氟烷在缺氧前45 min給予，給藥時(shí)間為30 min，沖洗15min。Bisindolylmaleimide Ⅰ(0.02μmol·L-1)在缺氧前75 min給予，給藥時(shí)間為30 min。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組取腦片4—5片用TTC染色，酶標(biāo)儀測(cè)定OD490值，與空白對(duì)照值比較，分析腦片活性。其余腦片用于免疫組織化學(xué)或免疫印跡方法分析PKCγ表達(dá)的變化。