維甲酸受體β2表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致環(huán)氧合酶2表達(dá)上調(diào)在食管癌發(fā)生中的作用.pdf

1、背景：食管癌發(fā)病率較高,預(yù)后較差,嚴(yán)重影響人類的健康。其地區(qū)差異性較為明顯,但發(fā)病的詳細(xì)機(jī)制尚不十分明確。國內(nèi)外大量文獻(xiàn)報(bào)道吸煙、飲酒、環(huán)境污染物(如BPDE,4-NQO等)等危險(xiǎn)因素均可引起腫瘤相關(guān)啟動(dòng)基因(如EGFR,p-ERK1/2,COX-2等)表達(dá)上調(diào)或抑癌基因(如p53,RAR-β2等)表達(dá)下調(diào),從而導(dǎo)致食管癌的發(fā)生,但關(guān)于RAR-β2與EGFR,p-ERK1/2,COX-2等在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中作用的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少。本

2、課題組前期研究結(jié)果表明食管癌細(xì)胞中RAR-β2基因表達(dá)下調(diào)可以引起COX-2基因表達(dá)上調(diào),進(jìn)一步導(dǎo)致EGFR,p-ERK1/2及AP-1等基因的表達(dá)升高,但這些基因之間相互作用的分子生物學(xué)機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
　　目的：研究食管癌組織或細(xì)胞中RRIG1,RAR-β2,EGFR,p-ERK1/2及COX-2等基因mRNA或蛋白的表達(dá)情況,探討這些基因和蛋白的表達(dá)異常在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相關(guān)臨床病理意義。
　　方法：1

3、.利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)研究EGFR, p-ERK1/2及COX-2等蛋白在正常食管黏膜組織、食管上皮內(nèi)瘤變組織及ESCC組織中的表達(dá)情況,分析其臨床病理意義;利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)ESCC組織及正常食管黏膜組織中RRIG1 mRNA的表達(dá)水平;采用原位雜交技術(shù)研究食管癌組織中RAR-β2與COX-2 mRNA的表達(dá)情況,分析其相互聯(lián)系。
　　2.利用siRNA技術(shù)抑制食管癌TE-8,SKGT-4及HCE-4細(xì)胞中COX-2

4、的表達(dá),比較COX-2低表達(dá)組和對(duì)照組細(xì)胞的生長差別;用4-NQO處理食管癌TE-3,TE-8細(xì)胞及轉(zhuǎn)染SV-40后永生的食管上皮 HET-1A細(xì)胞,提取細(xì)胞mRNA和蛋白,利用qRT-PCR及Western blotting比較處理組和對(duì)照組細(xì)胞中RAR-β2,p-ERK1/2,COX-2,t-ERK1/2及AP-1等基因mRNA和蛋白的表達(dá)差別,闡述其相互關(guān)系。
　　3.利用化學(xué)物質(zhì)4-NQO誘導(dǎo)C57BL6小鼠食管癌的發(fā)生,

5、采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)處理組及對(duì)照組小鼠食管組織中p-ERK1/2及COX-2蛋白表達(dá)差別;利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)兩組標(biāo)本中RAR-β2及COX-2 mRNA的表達(dá)變化。此外,利用甲基化特異性PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠ESCC組織RAR-β2基因是否發(fā)生甲基化修飾。
　　結(jié)果：1.在人體正常食管黏膜組織、食管上皮內(nèi)瘤變組織及ESCC組織中,EFGR蛋白的陽性率分別為7.2％,38.1%及41.1%,食管上皮內(nèi)瘤變組織和ESCC組織中

6、的陽性率均明顯高于正常食管黏膜組織,其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.398,P=0.002;χ2=23.044,P=0.000);p-ERK1/2的陽性率分別為5.8%,14.3%及18.9%,其中ESCC組織 p-ERK1/2的陽性率顯著高于正常食管粘膜組織,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.84,P=0.018);COX-2蛋白的陽性率分別為20.3%,28.6%及42.2%,ESCC組織中COX-2陽性率明顯高于正常食管粘膜組織,其

7、差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.536,P=0.004)。低分化ESCC組織中EGFR, p-ERK1/2及COX-2蛋白的表達(dá)明顯高于中分化及高分化ESCC組織(分別為χ2=12.022,P=0.001;χ2=0.394,P=0.752及χ2=9.274,P=0.003)。p-ERK1/2蛋白的表達(dá)與ESCC患者熱燙飲食(T>70℃)、術(shù)后5年生存率及腫瘤組織的浸潤深度明顯相關(guān)(分別為χ2=6.795,P=0.016;χ2=5.394,

8、P=0.030及χ2=7.727,P=0.049)。正常食管黏膜組織中RRIG1基因mRNA的表達(dá)是ESCC組織的2.19倍(Z=-1.988,P=0.049)。食管癌組織中RAR-β2與COX-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(McNammar檢驗(yàn),P=0.001)。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,抑制COX-2基因表達(dá)后食管癌細(xì)胞的生長受到抑制;4-NQO可以引起食管癌TE-3細(xì)胞及食管上皮HET-1A細(xì)胞中RAR-β2 mRNA表達(dá)

9、下調(diào),并且上調(diào)COX-2 mRNA的表達(dá)。此外,4-NQO處理食管癌細(xì)胞及HET-1A細(xì)胞引起p-ERK1/2,COX-2及AP-1蛋白表達(dá)均上調(diào)。
　　3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4-NQO使ESCC組織中RAR-β2基因啟動(dòng)子CpG島的DNA序列發(fā)生甲基化修飾,降低RAR-β2表達(dá)水平,導(dǎo)致COX-2表達(dá)上調(diào)。與對(duì)照組相比,4-NQO處理組小鼠食管組織中COX-2及p-ERK1/2蛋白表達(dá)均上調(diào)。
　　結(jié)論：EGFR,p-ER