香蘭素衍生物抑制DNA-PKcs活性和抗癌細(xì)胞增殖及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：本研究從香蘭素衍生物中篩選抑制DNA-PKcs活性及抗癌細(xì)胞增殖更強(qiáng)的衍生物，且探討其作用機(jī)理，旨在發(fā)現(xiàn)新的靶向性抗癌活性化合物。 方法：采用MTY法、細(xì)胞克隆形成法和單細(xì)胞電泳檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞增殖活性、輻射敏感性和DNA損傷的影響；以p53蛋白特異肽段作為底物，32T-ATP摻入的磷酸化反應(yīng)檢測(cè)化合物對(duì)DNA-PKcs激酶活性的影響；流式細(xì)胞術(shù)、Hoechst33258熒光染色及DNALadder等檢測(cè)細(xì)胞凋亡，透射電鏡

2、觀測(cè)HepG2細(xì)胞自吞噬死亡；用原位免疫熒光雜交和激光共聚焦顯微鏡觀察紡錘體結(jié)構(gòu)；熒光探針標(biāo)記檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS變化；Westernblot檢測(cè)化合物作用后凋亡相關(guān)蛋白和PBK／Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白變化。 結(jié)果：篩選出抑制多種來(lái)源癌細(xì)胞增殖的香蘭素衍生物BVAN3208，并申請(qǐng)了國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利；結(jié)果表明BVAN3208介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)DNA-PKcs的降解，抑制DNA-PKcs激酶活性；BVAN3208對(duì)所測(cè)試的近十余種癌細(xì)胞有顯著殺傷

3、效應(yīng)，對(duì)正常肝細(xì)胞L02和正常人淋巴母細(xì)胞的毒性顯著低于癌細(xì)胞；BVAN3208誘發(fā)細(xì)胞ROS水平增高和DNA損傷，誘發(fā)多種腫瘤細(xì)胞G2／M期阻滯及凋亡，破壞紡錘體的結(jié)構(gòu)，誘發(fā)細(xì)胞自吞噬死亡和有絲分裂災(zāi)難性死亡；BVAN3208抑制Akt蛋白磷酸化，影響Akt/GSK3β和Akt／Bad信號(hào)通路。 結(jié)論：篩選出具有明顯抑制癌細(xì)胞增殖和輻射增敏作用的香蘭素衍生物BVAN3208，驗(yàn)證了BVAN3208作為DNA-PKcs抑制劑是一