血鏈球菌細(xì)菌素的分離、純化及其化學(xué)組成的測(cè)定.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血鏈球菌細(xì)菌素的分離、純化及其化學(xué)組成的測(cè)定姓名：寇育榮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：潘亞萍20000401將血鏈球菌JFr標(biāo)準(zhǔn)株接種于5000mlTPY液體培養(yǎng)基中，厭氧培養(yǎng)48小時(shí)，培養(yǎng)液用于提取血鏈球菌的細(xì)菌素。2血鏈球菌細(xì)菌素的提純(1)血鏈球菌細(xì)胞外蛋白的粗提將細(xì)菌培養(yǎng)液離心后的上清液，加入無(wú)水乙醇，再次低溫離心后，收集沉淀，以真空凍干機(jī)凍干。(2)羥基磷灰石(HA)柱層析將粗提物溶液分

2、別用001M，0075M，014M和02M(pH一72)的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行階梯式梯度洗脫，收集洗脫液。(3)中空纖維柱超濾脫鹽、濃縮加蒸餾水將各峰的收集液分別反復(fù)超濾除鹽，直至檢測(cè)不出PO。3一為止。濃縮后保存。(4)SephadexG一150凝膠柱層析純化、測(cè)分子量將HA柱層析分離后具有抑菌活性的組分上柱，蒸餾水洗脫。測(cè)分子量時(shí)，以標(biāo)準(zhǔn)物分子量的對(duì)數(shù)對(duì)記錄儀的走紙長(zhǎng)度做圖，得工作曲線。(5)SDSPAGE檢測(cè)純度、測(cè)亞基分子量將Sep