通脈止血方對(duì)免疫性血小板減少性紫癜動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：免疫性血小板減少性紫癜(ITP)是常見的小兒出血性疾病，以出血及外周血小板減少，骨髓巨核細(xì)胞正?；蛟龆嗖橛谐墒煺系K為主要表現(xiàn)。其發(fā)病原因尚未完全闡明。但越來越多的資料顯示，在ITP發(fā)病中，細(xì)胞免疫起了非常重要的作用。而運(yùn)用中藥治療本病取得了滿意的療效，可以從根本上調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。 導(dǎo)師經(jīng)過多年的臨床研究發(fā)現(xiàn)小兒ITP通常具有熱盛動(dòng)血，迫血妄行的病機(jī)特點(diǎn)，同時(shí)“瘀血”這一病理機(jī)制貫穿于疾病始終，而且在運(yùn)用寒涼藥物止血時(shí)

2、，應(yīng)注意調(diào)氣與顧護(hù)脾胃，故主張以涼血祛瘀止血為主，佐以健脾益氣來治療本病，并自擬通脈止血方(三七、生地、茜草、丹皮、仙鶴草等)。本課題通過觀察通脈止血方對(duì)ITP小鼠的血小板、免疫器官、骨髓巨核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞亞群、紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)的影響，探討通脈止血方對(duì)小兒免疫性血小板減少性紫癜的藥效及作用機(jī)理，為本方治療小兒ITP的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：造模程序參照楊宇飛方法，首先制作豚鼠抗小鼠抗血小板血清(GP-APS)備用。然后選用

3、60只同批出生健康BALB/C雌性小鼠，用隨機(jī)法抽取12只作為正常組，其余作為實(shí)驗(yàn)組。于1、3、5、7、9、11、13天，按照100μl/20g給實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔注射1：8用生理鹽水稀釋的APS。反復(fù)注射APS使小鼠血小板在7天內(nèi)維持原水平的11％～25％，即為成功模型。同時(shí)按照100μl/20g給正常組小鼠腹腔注射生理鹽水。除正常組外，造模第7天，取實(shí)驗(yàn)組小鼠尾血，按照血小板計(jì)數(shù)隨機(jī)分為4組，即模型組、潑尼松組、通脈止血方小劑量組、通脈

4、止血方大劑量組，每組12只。在第1次注射APS后的第8天，模型組和正常組灌服蒸餾水，對(duì)照組灌服醋酸潑尼松(0.2mg/20g)，治療組灌服通脈止血方(小劑量組：0.424g生藥/20g；大劑量組：0.848g生藥/20g)，每日1次，連續(xù)給藥1周。最后一次給藥后禁食12小時(shí)，先取小鼠尾血進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，然后摘眼球取血，制備血漿、血清，以進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群及紅細(xì)胞免疫功能測定。剖腹取出脾臟、胸腺、右側(cè)腎上腺，吸去血跡，稱重以計(jì)算臟器系數(shù)。

5、并取右側(cè)股骨骨髓，涂片進(jìn)行骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類觀察。 結(jié)果：1血小板計(jì)數(shù)的變化治療前，各實(shí)驗(yàn)組血小板計(jì)數(shù)與正常組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，但它們之間比較無顯著性差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，與正常組比較，潑尼松組和大、小劑量組血小板計(jì)數(shù)無顯著性差異(P＞0.05)；與模型組相比，潑尼松組和大、小劑量組血小板數(shù)明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001)；潑尼松組和大、小劑量組之間血小板計(jì)數(shù)兩兩比較無顯著性差異(

6、P＞0.05)。 2免疫器官系數(shù)的變化各實(shí)驗(yàn)組脾臟均見不同程度增大，其中以模型組增大最為明顯，各組與正常組比較，均有顯著性差異(P＜0.001)；大劑量組與潑尼松組脾臟系數(shù)較模型組和小劑量組均有顯著性差異(P＜0.001)，而兩組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。除模型組外，其它各組胸腺系數(shù)較正常組無顯著性差異(P＞0.05)。各組小鼠腎上腺系數(shù)均無明顯異常，較正常組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 3骨髓巨核細(xì)胞總數(shù)

7、及其分類的影響各實(shí)驗(yàn)組骨髓巨核細(xì)胞總數(shù)均有所增多。從各組巨核細(xì)胞分類所占百分比可以看出，正常組骨髓巨核細(xì)胞以產(chǎn)板型為主；模型組骨髓巨核細(xì)胞總數(shù)較正常組明顯增多，有顯著性差異(P＜0.001)，但以顆粒型為主；大劑量組骨髓巨核細(xì)胞總數(shù)接近正常(P＞0.05)，且以產(chǎn)板型為主；潑尼松組和小劑量組骨髓巨核細(xì)胞總數(shù)較正常組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，但以產(chǎn)板型為主；與模型組比較巨核細(xì)胞總數(shù)下降，有顯著差異(P＜0.001)。 4外周血

8、T淋巴細(xì)胞亞群的改變與正常組相比，模型組CD4+降低(P＜0.05)，CD8+明顯升高(P＜0.001)，CD4+/CD8+值明顯降低，有顯著性差異(P＜0.001)，可見ITP小鼠T淋巴細(xì)胞免疫功能低下；大劑量組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+與正常組相比，均無顯著性差異(P＞0.05)；大劑量組CD4+/CD8+與潑尼松組、小劑量組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 5紅細(xì)胞免疫功能的影響與正常組相比，模型組、潑尼松

9、組和小劑量組RBC-C3bRR和RBC-ICR均明顯下降，有顯著性差異(P＜0.01)；大劑量組RBC-C3bRR和RBC-ICR升高，與正常組相比無顯著差異(P＞0.05)；大劑量組RBC-C3bRR和RBC-ICR與潑尼松組、模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)證明通脈止血方具有如下作用：(1)提升血小板數(shù)；(2)促使骨髓巨核細(xì)胞總數(shù)恢復(fù)，使產(chǎn)板巨核細(xì)胞數(shù)增加，并向成熟方向分化；(3)促使脾臟免疫功能恢復(fù)