消痰散結(jié)方對裸鼠胃癌原位移植模型乙酰肝素酶影響的研究.pdf

1、胃癌是當(dāng)今世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，居我國消化道惡性腫瘤之首。胃癌的治療近30年雖然取得了長足的進(jìn)展，然而國內(nèi)外胃癌術(shù)后的5年生存率仍徘徊20～30％。腫瘤的轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響了患者術(shù)后生存期。魏品康教授根據(jù)多年從事的胃癌臨床治療工作經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為“痰”是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)；并運(yùn)用消痰散結(jié)方治療腫瘤，取得了滿意的效果。乙酰肝素酶(HPA)是近年來發(fā)現(xiàn)在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的一種酶，具有裂解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜(B

2、M)，促進(jìn)微血管生成的作用，在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中起重要的作用。本課題基于HPA對腫瘤轉(zhuǎn)移的影響，建立裸鼠原位移植模型，探討痰消散結(jié)方對腫瘤轉(zhuǎn)移的影響，深入研究消痰散結(jié)方抗腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
　　 目的：建立裸鼠人胃腺癌MKN-45原位移植瘤模型，通過應(yīng)用消痰散結(jié)方干預(yù)，研究消痰散結(jié)方對模型鼠外周血CK-20mRNA及腫瘤組織中MVD和HPA的影響，探討消痰散結(jié)方在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面可能的機(jī)制。
　　 方法：1.利用原位移植的方

3、法，將人胃癌MKN-45瘤株建立在BALB/C裸小鼠胃壁漿膜層下，觀察移植瘤后小鼠生存狀態(tài)。
　　 2.采用完全隨機(jī)的方法將30只裸鼠模型分為3組，即：生理鹽水組、消痰散結(jié)方組、5-Fu組，每組10只。于模型建立后第二天后開始給藥，生理鹽水0.4ml/次，1次/d，連續(xù)灌胃6周；消痰散結(jié)方濃縮煎劑0.4ml/次，1次/d，連續(xù)灌胃6周；0.2ml/次，按60mg/kg腹腔注射，1次/周，連續(xù)用藥3周。
　　 3.于第6周

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，眼球取血，RT-PCR法測定CK-20mRNA。處死動物，打開腹腔，收集原位瘤組織，稱取瘤重，計(jì)算抑瘤率，計(jì)算肝臟轉(zhuǎn)移灶數(shù)目。
　　 4.取瘤組織進(jìn)行免疫組化染色，計(jì)算腫瘤組織中MVD，測定分析原位移植瘤組織HPA的表達(dá)強(qiáng)度。
　　 結(jié)果：1.成功建立人胃痛MKN-45裸鼠原位移植模型。造模后第二周起，部分裸鼠可在上腹部觸及硬腫塊，后腫塊逐漸增大，質(zhì)地較硬，較大者中間可有壞死組織。移植瘤原位成功率100％。測

5、定瘤重，計(jì)算抑瘤率，消痰散結(jié)方、5-Fu組的抑瘤率分別為56.3％、47.2％，統(tǒng)計(jì)分析顯示，消痰散結(jié)方組、5-Fu組與生理鹽水組移植瘤質(zhì)量比較有明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P＜0.05)；同時消痰散結(jié)方組較生理鹽水組肝臟轉(zhuǎn)移灶有明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007,P＜0.05)；5-Fu組與生理鹽水組差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03,P＜0.05)；而消痰散結(jié)方組與5-Fu組之間差異則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.53

6、8,P＞0.05)。
　　 2.消痰散結(jié)方組與生理鹽水組相比，消痰散結(jié)方能顯著降低外周血中CK20-mRNA的表達(dá)(P=0.004，P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而5-Fu組則沒有明顯的下降(P=0.567，P＞0.05)。
　　 3.結(jié)果顯示消痰散結(jié)方組能顯著減少腫瘤組織中MVD(P=0.00，P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而5-Fu組則沒有降低作用，(P=0.584，P＞0.05)。消痰散結(jié)方組與生理鹽水組瘤

7、組織中HPA均有表達(dá)，消痰散結(jié)方組較生理鹽水組能顯著降低腫瘤組織HPA的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01，P＜0.05)；而5-Fu組則無明顯的降低的作用(P=0.248，P＞0.05)。
　　 結(jié)論：1.利用人胃腺痛MKN-45瘤株成功建立裸鼠原位移植模型，消痰散結(jié)方對裸鼠原位移植瘤的生長具有明顯的抑制作用，同時能有效減少肝臟轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目；
　　 2.消痰散結(jié)方能有效減少外周血CK20mRNA的表達(dá)，明顯抑