毛果楊組培再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系研究.pdf

1、毛果楊(Popolus trichocarpa)具有基因組相對較小、染色體數(shù)目少、生長速度快、無性繁殖容易等特點，是第一個全基因組測序的木本植物，其遺傳轉(zhuǎn)化對木本植物功能基因組學(xué)的研究具有極其重要的意義。本研究分別以毛果楊組培苗的莖段和葉片作為外植體，研究了不同取材部位、接種方式及外源激素組合對不定芽誘導(dǎo)的影響，建立了高效的毛果楊組培再生體系。在此基礎(chǔ)上探討了菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間、乙酰丁香酮濃度及添加方式對遺傳轉(zhuǎn)化率的影響，建

2、立了高效的毛果楊遺傳轉(zhuǎn)化體系，并對轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行了檢測。本文的主要研究結(jié)果如下:
　　1.以溫室培養(yǎng)的毛果楊嫩枝為基礎(chǔ)材料，確定了毛果楊枝條的最適無菌處理條件。用70％酒精消毒30 sec，再用3％NaClO消毒8min，無菌水清洗3遍，最后用無菌濾紙吸干材料表面的水分，接種到生根培養(yǎng)基上，15d污染率為0。
　　2.建立了毛果楊組培苗莖段和葉片直接誘導(dǎo)不定芽的再生體系。莖段分化的最佳取材部位是形態(tài)學(xué)上端第二、三節(jié)莖段，不定芽

3、分化的最適培養(yǎng)基為WPM+0.03 mg·L-16-BA+0.02 mg·L-1 IBA+0.0008 mg·L-1 TDZ，培養(yǎng)25 d分化率達(dá)到100％，平均分化芽數(shù)為18.77，平均芽長為1.25 cm;葉片分化的最佳取材部位是形態(tài)學(xué)上端第三、四、五片葉，葉背向下接種，最適分化培養(yǎng)基為WPM+0.04 mg·L-16-BA+0.02 mg·L-1 IBA+0.001mg·L-1 TDZ，培養(yǎng)25 d分化率達(dá)到100％，平均分化芽數(shù)

4、為12.11，平均芽長為1.20cm;不定芽長至1-2 cm且有明顯主莖時，接種到WPM+0.1 mg·L-1 IBA的生根培養(yǎng)基中，5-7 d開始生根，生根率為100％;
　　3.建立了高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系。確定了毛果楊外植體抗性芽分化及生根篩選過程中Kan的最佳選擇壓為30 mg·L-1，最適抑菌條件為200 mg·L-1Cef;莖段外植體在菌液濃度OD600值為0.4的條件下侵染20 min，共培養(yǎng)2d，在侵染及共培養(yǎng)過程中添