粳型水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、水稻是世界的主要糧食作物之一，提供了世界三分之一以上人口的食物和能量，水稻產(chǎn)量的高低和品質(zhì)的優(yōu)劣直接關(guān)系到眾多人的健康水平。近年來，運(yùn)用基因工程手段培育轉(zhuǎn)基因水稻為傳統(tǒng)水稻育種和遺傳改良開辟了新的途徑。水稻體細(xì)胞組織培養(yǎng)作為水稻基因工程的基礎(chǔ)技術(shù)，在水稻遺傳改良中具有重要的作用。在水稻基因工程中，為了達(dá)到比較理想的水稻轉(zhuǎn)化效果，我們要建立一個(gè)高效的，穩(wěn)定的再生系統(tǒng)。隨著植物基因工程技術(shù)的普及，越來越多的實(shí)驗(yàn)室希望建立起一套高效、經(jīng)濟(jì)和簡

2、便的轉(zhuǎn)基因技術(shù)體系。
　　 本實(shí)驗(yàn)的主要研究結(jié)果為：
　　 建立了粳稻松粳Ⅰ號(hào)的成熟種胚的再生體系，并優(yōu)化了技術(shù)，在試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，對種子用75％酒精3min+0.1％升汞10min+10％次氯酸鈉15min的處理方法滅菌效果較好。選擇以NB(N6大量元素、B5微量元素及無機(jī)成份)培養(yǎng)基作為粳稻愈傷組織誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基，加入2.0mg/L的2，4-D與0.5 mg/L的6-BA搭配效果最好，且添加適量的水解酪蛋白與谷氨酰

3、胺時(shí)，能提高愈傷組織的質(zhì)量。繼代用MS-N6基本培養(yǎng)基交替使用，激素配比為2mg/L2,4-D+1mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA的有利于種胚愈傷組織繼代；繼代時(shí)添加適量維生素C及活性碳可以減少愈傷組織褐化的發(fā)生；愈傷組織繼代培養(yǎng)時(shí)間宜控制在10d左右，不要超過14d，且分化最好在繼代3次內(nèi)進(jìn)行。最佳分化培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0+NAA0.2+TDZ0.1(mg/L)。
　　 以粳型水稻松粳Ⅰ號(hào)的成熟種胚誘導(dǎo)出的愈傷

4、組織為轉(zhuǎn)化受體，在實(shí)驗(yàn)中，測定了利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻的體系中，篩選劑Kan的濃度、愈傷組織與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)的時(shí)間、最佳的洗菌方式、干燥處理的影響等對粳型水稻遺傳轉(zhuǎn)化的影響。實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為，篩選劑Kan的濃度最好為200mg/L，愈傷組織與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)3d后進(jìn)行篩選培養(yǎng)獲得的抗性愈傷組織最多，抗性愈傷組織的獲得率最高。在接種篩選培養(yǎng)基之前，干燥處理可以有效的抑制農(nóng)桿菌的生長和繁殖，提高抗性愈傷組織的獲得率。
　　 實(shí)驗(yàn)以松粳Ⅰ號(hào)成