Pokemon在肝癌細胞HepG2中對CyclinA的調(diào)控作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：明確肝癌細胞中Pokemon對CyclinA的調(diào)控作用，為二者的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：構(gòu)建兩段不同長度的CyclinA熒光素酶報告基因質(zhì)粒載體：pLuc-300、pLuc-600，均分別與 Pokemon表達質(zhì)粒和pcDNA3.1(-)轉(zhuǎn)染入體外培養(yǎng)的肝癌細胞HepG2中，培養(yǎng)48小時后采用雙熒光素酶報告基因檢測法檢測CyclinA啟動子的轉(zhuǎn)錄活性；將Pokemon siRNA和Scramber siRNA分別轉(zhuǎn)染入

2、肝癌細胞 HepG2中，培養(yǎng)0、24、48、72小時后提取細胞總蛋白，采用Western Blot法檢測Pokemon和CyclinA的蛋白表達。
　　結(jié)果：雙熒光素酶報告基因檢測法顯示構(gòu)建的pLuc-300、pLuc-600均有轉(zhuǎn)錄活性，其中pLuc-300轉(zhuǎn)錄活性較pLuc-600強，Pokemon對二者的轉(zhuǎn)錄活性均有抑制。Western Blot法發(fā)現(xiàn)隨著轉(zhuǎn)染Pokemon siRNA時間的增加，Pokemon蛋白表達逐漸減

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