氧化鐵磁性納米顆粒介導(dǎo)pHIF-1α-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)耐順鉑肺腺癌影響的體外體內(nèi)研究.pdf

1、目的：肺癌耐藥成為目前困擾肺癌治療的棘手問題，亦是肺癌生存率一直得不到改善的重要原因之一。近年來，HIF-lα與腫瘤耐藥關(guān)聯(lián)倍受關(guān)注。本研究構(gòu)建HIF-lα-shRNA重組質(zhì)粒，應(yīng)用新近發(fā)展的pll-DCIONP作載體，與常用的脂質(zhì)體載體比較，轉(zhuǎn)染耐順鉑肺腺癌，分析pll-DCIONP介導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞可行性同時(shí)，從體外體內(nèi)兩個(gè)層面研究pHIF-lα-shRNA轉(zhuǎn)染對(duì)耐順鉑肺腺癌細(xì)胞及其移植瘤生長與耐順鉑的影響，并初步探討其可能的機(jī)制。

2、 方法：1.針對(duì)HIF-lα設(shè)計(jì)RNA干擾作用靶點(diǎn)，構(gòu)建pHIF-lα-shRNA重組質(zhì)粒，半定量RT-PCR法分析pll-DCIONP及脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞后HIF-lα、耐藥蛋白MRP及LRP的mRNA的表達(dá)，細(xì)胞免疫化學(xué)法分析HIF-lα、MRP及LRP的蛋白表達(dá)，MTT法計(jì)算順鉑作用下不同組細(xì)胞的死亡率。2.建立移植瘤裸鼠動(dòng)物模型，在外加磁場作用下，pll-DCIONP介導(dǎo)pHIF-lα-shRNA轉(zhuǎn)染尾靜脈

3、注射裸鼠，觀察記錄裸鼠體重及移植瘤體積變化，計(jì)算腫瘤生長指數(shù)，HE染色觀察處理后裸鼠肝腎組織病理，免疫組織化學(xué)法分析腫瘤組織HIF-lα、MRP及LRP的蛋白表達(dá) 結(jié)果：1.成功構(gòu)建了針對(duì)HIF-lα設(shè)計(jì)的pHIF-lα-shRNA質(zhì)粒，pll-DCIONP介導(dǎo)轉(zhuǎn)染相對(duì)效率高于脂質(zhì)體介導(dǎo)（P<0.01）；2.pHIF-lα-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞后，HIF-lαmRNA及蛋白表達(dá)和MRP、LRPmRNA及蛋白表達(dá)

4、均下降，pll-DCIONP介導(dǎo)組大于脂質(zhì)體組（P<0.01）； HIF-lα mRNA及蛋白表達(dá)下調(diào)與MRP、LRPmRNA及蛋白表達(dá)的下調(diào)顯著相關(guān)（r=0.900，0.915 P<0.01）、（r=0.901，0.896 P<0.01）；3.轉(zhuǎn)染后A549/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性降低（P<0.05）；4.成功建立裸鼠耐順鉑肺腺癌移植瘤動(dòng)物模型，pll-DCIONP介導(dǎo)pHIF-lα-shRNA在外加磁場引導(dǎo)下靶向作用于移植瘤后，以

5、腫瘤生長指數(shù)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，單純質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組相比，腫瘤生長受抑制，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染聯(lián)合順鉑治療組與單純質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組和單純順鉑治療組相比，腫瘤生長明顯受抑制（P<0.01），其中pll-DCIONP介導(dǎo)組作用明顯強(qiáng)于脂質(zhì)體介導(dǎo)組（P<0.01）；5.靶向作用后腫瘤組織HIF-lα蛋白表達(dá)下降，同時(shí)耐藥相關(guān)蛋白MRP，LRP蛋白表達(dá)下降，pll-DCIONP介導(dǎo)組作用大于脂質(zhì)體組（P<0.01），HIF-lα蛋白表達(dá)下調(diào)與MRP、LRP蛋白表達(dá)的

6、下調(diào)顯著相關(guān)（r=0.918，0.906P<0.01）；6.pll-DCIONP介導(dǎo)pHIF-lα-shRNA轉(zhuǎn)染治療荷瘤裸鼠的肝、腎組織無明顯病理改變。 結(jié)論：1.成功構(gòu)建了HIF-1α-shRNA質(zhì)粒，pll-DCIONP介導(dǎo)相對(duì)轉(zhuǎn)染效率高于脂質(zhì)體介導(dǎo)。2.pHIF-1α-shRNA轉(zhuǎn)染后，A549/DDP細(xì)胞HIF-lα mRNA及蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)，并可能通過某種機(jī)制使得MRP、LRP mRNA及蛋白的表達(dá)下調(diào)，從而提高