大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞超微超順磁性氧化鐵顆粒標(biāo)記及體外MR成像研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　 惡性腫瘤生長(zhǎng)迅速，發(fā)病率及死亡率都相當(dāng)高，已經(jīng)成為威脅人類健康的重大難題。腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)都離不開血管的生成。盡管腫瘤組織不存在有序的結(jié)構(gòu)，但從血管新生的觀點(diǎn)來說，新生血管在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用和器官發(fā)生發(fā)育同樣重要。內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體，具有向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的潛能。在正常狀態(tài)下，外周血中的EPCs含量很少，而腫瘤

2、組織則可以釋放各種細(xì)胞因子，促使骨髓中的EPCs 動(dòng)員到外周血循環(huán)中，并逐步募集到血管新生活躍部位，參與該部位的血管發(fā)生和血管生成。
　　 EPCs的這種特性給我們治療腫瘤帶來了新契機(jī)：直接抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖分化或?qū)⑵渥鳛檩d體攜帶腫瘤抑制基因，并特異性地導(dǎo)入腫瘤生長(zhǎng)部位，都有可能成為抗腫瘤治療的新策略。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究采用貼壁法分離和培養(yǎng)大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞，并以多聚賴氨酸（Poly-L-Lysine,PLL）作為

3、轉(zhuǎn)染劑，在體外利用超微超順磁性氧化鐵顆粒（ultrasmall superparamagnetic iorn oxide ,USPIO）標(biāo)記內(nèi)皮祖細(xì)胞，研究磁性標(biāo)記對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特性的影響；在體外對(duì)標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行磁共振成像，尋找標(biāo)記細(xì)胞體外掃描的最佳序列，為將來觀察移植細(xì)胞的遷移及歸巢提供依據(jù)。
　　 材料和方法：
　　 SD 雄性大鼠100g 左右，取雙側(cè)股骨和脛骨，收集骨髓液。利用淋巴細(xì)胞分離液分離出單核細(xì)胞，采用貼壁生

4、長(zhǎng)法分離純化內(nèi)皮祖細(xì)胞。以PLL 作為轉(zhuǎn)染劑用USPIO對(duì)EPCs 進(jìn)行磁性標(biāo)記，標(biāo)記濃度為25ug/ml。計(jì)算標(biāo)記后1、3、5天細(xì)胞標(biāo)記陽性率、標(biāo)記細(xì)胞活力，采用四氮噻唑藍(lán)(MTT)比色試驗(yàn)評(píng)價(jià)USPIO-PLL 標(biāo)記EPCs 后對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。對(duì)不同濃度細(xì)胞懸液進(jìn)行T2map、T2*map 序列掃描，測(cè)量不同濃度細(xì)胞的弛豫時(shí)間及弛豫率，研究細(xì)胞濃度和弛豫率之間的關(guān)系，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 對(duì)采

5、用密度梯度離心法獲取的大鼠骨髓單核細(xì)胞在體外進(jìn)行EGM-2 誘導(dǎo)培養(yǎng)，可分化為內(nèi)皮祖細(xì)胞。利用USPIO-PLL 作為細(xì)胞內(nèi)造影劑可以高效標(biāo)記內(nèi)皮祖細(xì)胞。普魯士藍(lán)染色顯示鐵顆粒位于胞質(zhì)內(nèi)，其72 小時(shí)細(xì)胞標(biāo)記率達(dá)98 ％。臺(tái)盼藍(lán)染色及MTT 比色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，磁性標(biāo)記對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特性無明顯影響。
　　 同時(shí)，磁共振體外T2map 及T2*map 掃描顯示細(xì)胞弛豫率隨細(xì)胞濃度的減少而減少，呈線性相關(guān)，其R2*效應(yīng)直線斜率為R2