皮質(zhì)類固醇激素性青光眼大鼠眼內(nèi)AQP1和AQP4表達的實驗研究.pdf

1、皮質(zhì)類固醇激素性青光眼(glucocorticoidinducedglaucoma，GIG)是由于眼局部或全身使用皮質(zhì)類固醇激素(glucocorticoid，GC)而誘發(fā)的一種開角型青光眼，文獻報道GC可導(dǎo)致90％以上原發(fā)開角型青光眼患者眼壓升高。小梁網(wǎng)的病理改變導(dǎo)致的房水外流阻力增加誘發(fā)眼壓升高。盡管存在諸多學(xué)說，如：精胺多糖(agmatinepolyglucose，GAGs)學(xué)說，小梁細胞吞噬學(xué)說，遺傳學(xué)說等，但長期應(yīng)用皮質(zhì)類固醇

2、激素誘發(fā)青光眼的發(fā)病機制至今尚不清楚。 目前關(guān)于GIG的研究更多的集中在小梁網(wǎng)的結(jié)構(gòu)、功能，小梁網(wǎng)細胞特性、膜受體，如皮質(zhì)類固醇激素受體和水通道蛋白的研究，小梁網(wǎng)細胞膜膜片鉗、單層細胞電阻測量儀體外測量跨小梁細胞電阻等生理功能性研究。此外，細胞外基質(zhì)及基因調(diào)控等方面也是研究的熱點。 近年來隨著水通道蛋白概念的提出和眼內(nèi)不同組織特異性水通道蛋白(aquaporin，AQPs)的檢出，有學(xué)者認為，小梁細胞AQPl的表達可能為

3、皮質(zhì)類固醇激素引起眼壓升高機制的研究帶來新的突破，也有學(xué)者推測，眼局部或全身使用皮質(zhì)類固醇激素可能使小梁細胞出現(xiàn)AQPl的異常表達和結(jié)構(gòu)改變，致使房水轉(zhuǎn)導(dǎo)功能下降，眼壓升高。 目前皮質(zhì)類固醇激素在臨床應(yīng)用廣泛，為進一步研究GIG的可能機制，本實驗通過免疫組化及RT-PCR半定量方法，觀察比較了正常和皮質(zhì)類固醇激素性青光眼大鼠眼內(nèi)水通道蛋白AQPl和AQP4的表達變化，旨在探討水通道蛋白AQPl和AQP4與皮質(zhì)類固醇激素性青光眼發(fā)

4、病機制的關(guān)系，為以后進一步的深入研究提供實驗數(shù)據(jù)和參考。 實驗方法 健康成年Wistar大鼠30只，隨機分為A、B兩組，A組10只不做處理；B組20只右眼隔日定時球結(jié)膜下注射地塞米松磷酸鈉(1ml：5mg)0．05ml，誘發(fā)皮質(zhì)類固醇激素性高眼壓，同時左眼注射等量無菌生理鹽水。Tono-PenXL眼壓計分別于每次用藥前測量記錄眼壓值，并于用藥后4wk摘除A、B兩組大鼠眼球，固定脫水，石蠟包埋，切片，免疫組化檢測眼內(nèi)通道A

5、QPl和AQP4的表達情況；同時提取房角組織總RNA，行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT—PCR)半定量檢測房角組織中AQPl和AQP4的mRNA水平。 結(jié)果 皮質(zhì)類固醇激素性青光眼大鼠模型：A組平均眼壓始終維持在14～15mmHg：B組右眼用藥后第10~12天眼壓開始逐漸升高，用藥4wk后右眼眼壓為(30．07±1．83)mmHg，升高(15．2±2．40)mmHg，與A組比較有明顯差異(尸<0．01)，左眼眼壓為(14．6

6、7±1．45)mmHg，較A組無明顯變化(尸>0．05)。免疫組化結(jié)果顯示：AQPl和AQP4均表達于各組大鼠睫狀體非色素上皮細胞，而房角組織未見AQP4的表達；B組右眼4wk后小梁網(wǎng)、Schlemm管內(nèi)皮細胞及細胞外基質(zhì)中AQPl表達量減少，而睫狀體非色素上皮細胞上AQPl和AQP4表達量未見變化；B組左眼4wk后上述各組織細胞上AQPl和AQP4的表達同A組，未見變化；RT—PCR結(jié)果顯示：A組大鼠房角組織AQPl的mRNA(灰度比