基于EST技術(shù)的丹參大規(guī)?；蚩寺〖捌渫庠椿蜣D(zhuǎn)化技術(shù)研究.pdf

1、陜西師范大學(xué)碩士學(xué)位論文基于EST技術(shù)的丹參大規(guī)?；蚩寺〖捌渫庠椿蜣D(zhuǎn)化技術(shù)研究姓名：閆亞平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：王喆之200505017 ．利用“P A T H W A Y ”分析對(duì)涉及代謝過(guò)程的2 ，6 8 9 個(gè)基因進(jìn)行了代謝途徑分析并對(duì)其在K E G G 代謝圖譜中的位置進(jìn)行了標(biāo)示。所有基因共涉及6 0 7 條代謝相關(guān)的酶，可歸入1 1 個(gè)大的代謝途徑，其中歸類到糖類代謝、氨基酸代謝、輔酶和輔因子代謝以及外源

2、物質(zhì)生物降解途徑中的酶較多，這可能與所取材料處于異養(yǎng)狀態(tài)有關(guān)。8 ．通過(guò)“D i g i t a lN o r t h e r n ”分析，說(shuō)明本研究所建立的文庫(kù)中與生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的基因如生長(zhǎng)素誘導(dǎo)蛋白基因、莖特異蛋白基因和逆境脅迫相關(guān)的基因如胚胎發(fā)育后期豐富蛋白基因、水通道蛋白基因、硫素蛋白基因、病程相關(guān)蛋白基因等得到了超豐度表達(dá)，這類基因的E S T 數(shù)占到總E S T 數(shù)的9 ，7 7 ％，陔結(jié)果與實(shí)驗(yàn)選材特征基本一致。9 ．初步篩

3、選影響了丹參農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系的因素，確定了丹參農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的基本程序：試管苗莖尖在M S 培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)1 0 d ，切取葉片切塊預(yù)培養(yǎng)1d ，過(guò)夜培養(yǎng)農(nóng)桿菌菌株至O D 6 0 0 0 ．8 ～1 ．0 ，離心收集菌體用M S 液體培養(yǎng)基稀釋至O D 6 0 0 0 ．4 ，浸染2 5m i n ，共培養(yǎng)3d ，芽誘導(dǎo)選擇培養(yǎng)2 次，每次1 0 d ，然后生根選擇2 次，每次1 5d ，最后在M S 基本培養(yǎng)基上生根和繼代培養(yǎng)。其中預(yù)培

4、養(yǎng)、共培養(yǎng)、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基為M S 附加B A P 4 ．4 岬0 1 ．1 - 1 和N A A O ．5 p ．m 0 1 ．1 ～，生根選擇及生根和繼代培養(yǎng)基為不含激素的M S 基本培養(yǎng)基。芽誘導(dǎo)選擇及生根選擇過(guò)程選擇壓均為卡那霉素6 0 n a g ．1 _ l ，抑菌素為頭孢霉素2 0 0 m g ．1 ～。1 0 ．通過(guò)轉(zhuǎn)化共獲得抗性芽7 1 株，經(jīng)P C R ，S o u t h e r nb l o t t i n g