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文檔簡介
1、本文介紹了為克隆中國蓮的熱激蛋白基因構(gòu)建的萌發(fā)3d經(jīng)42℃熱激2h的蓮胚軸cDNA文庫,隨機挑選單克隆,獲得可分析的287個EST序列,其中170條(59%)的EST屬于已知功能的基因。萌發(fā)蓮胚軸在42℃下熱處理2h后,熱激蛋白基因豐富表達,分離到2個laHSPs和6個smHSPs等熱激蛋白EST序列,占全部測定EST的2.8%。分離到蓮HSP17.5基因的全長cDNA,長度為901bp,5'非編碼區(qū)為165bp,開放讀碼框為468bp
2、,3'非編碼區(qū)為268bp。NnHSP17.5基因編碼156個氨基酸,分子量(MW)為17544.17Da,等電點(pI)為6.61。利用半定量RT-PCR技術(shù),分析了蓮種子萌發(fā)過程中熱激蛋白基因的表達。NnHSP17.5基因表達結(jié)果表明,熱激的干種子胚軸(吸脹1h)NnHSP17.5基因表達量比未熱激的干種子胚軸(吸脹1h)明顯增加;吸脹1d的胚軸(對照)NnHSP17.5基因表達量比熱激的胚軸(吸脹1d)高很多;蓮胚軸吸脹2d和3d
3、后,熱激增加了NnHSP17.5基因表達。NnHSP17.5、NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3都屬于細(xì)胞質(zhì)二型smHSP。然而,NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3在蓮種子萌發(fā)中的表達模式與NnHSP17.5的不同。吸脹1d內(nèi),蓮胚軸蓮NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3基因在熱激下表達量并沒有增加,吸脹2d后,熱激的蓮胚軸NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3的表達量均升高,吸脹3d時熱激的蓮胚軸NnsHSP
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