利用EST技術(shù)克隆蓮（Nelumbo nucifera Gaertn）熱激蛋白基因.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文介紹了為克隆中國(guó)蓮的熱激蛋白基因構(gòu)建的萌發(fā)3d經(jīng)42℃熱激2h的蓮胚軸cDNA文庫(kù)，隨機(jī)挑選單克隆，獲得可分析的287個(gè)EST序列，其中170條(59％)的EST屬于已知功能的基因。萌發(fā)蓮胚軸在42℃下熱處理2h后，熱激蛋白基因豐富表達(dá)，分離到2個(gè)laHSPs和6個(gè)smHSPs等熱激蛋白EST序列，占全部測(cè)定EST的2.8％。分離到蓮HSP17.5基因的全長(zhǎng)cDNA，長(zhǎng)度為901bp，5'非編碼區(qū)為165bp，開放讀碼框?yàn)?68bp

2、，3'非編碼區(qū)為268bp。NnHSP17.5基因編碼156個(gè)氨基酸，分子量(MW)為17544.17Da，等電點(diǎn)(pI)為6.61。利用半定量RT-PCR技術(shù)，分析了蓮種子萌發(fā)過(guò)程中熱激蛋白基因的表達(dá)。NnHSP17.5基因表達(dá)結(jié)果表明，熱激的干種子胚軸(吸脹1h)NnHSP17.5基因表達(dá)量比未熱激的干種子胚軸(吸脹1h)明顯增加；吸脹1d的胚軸(對(duì)照)NnHSP17.5基因表達(dá)量比熱激的胚軸(吸脹1d)高很多；蓮胚軸吸脹2d和3d

3、后，熱激增加了NnHSP17.5基因表達(dá)。NnHSP17.5、NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3都屬于細(xì)胞質(zhì)二型smHSP。然而，NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3在蓮種子萌發(fā)中的表達(dá)模式與NnHSP17.5的不同。吸脹1d內(nèi)，蓮胚軸蓮NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3基因在熱激下表達(dá)量并沒(méi)有增加，吸脹2d后，熱激的蓮胚軸NnsHSPCⅡ-2和NnsHSPCⅡ-3的表達(dá)量均升高，吸脹3d時(shí)熱激的蓮胚軸NnsHSP

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