雙歧桿菌對(duì)卵清蛋白致敏大鼠腸道通透性的保護(hù)作用.pdf

1、背景:食物過(guò)敏是兒童時(shí)期常見(jiàn)的過(guò)敏性疾病，嚴(yán)格避免接觸食物過(guò)敏原是預(yù)防食物過(guò)敏的最有效的治療手段，但其在現(xiàn)實(shí)生活中難以執(zhí)行。兒童時(shí)期持續(xù)的食物過(guò)敏可能導(dǎo)致成年期哮喘的發(fā)生，因此全世界都在積極探索一種簡(jiǎn)單易行預(yù)防和治療食物過(guò)敏的方法。在國(guó)外有使用益生菌預(yù)防性治療食物過(guò)敏的成功報(bào)道，提示益生菌對(duì)食物過(guò)敏的預(yù)防治療有一定的可行性。因食物過(guò)敏的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，需一步步研究、完善。國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有雙歧桿菌能降低OVA致敏大鼠腸道通透性的報(bào)道。

2、 目的:本研究通過(guò)觀察雙歧桿菌對(duì)卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)致敏大鼠的腸道黏膜通透性、腸黏膜組織形態(tài)學(xué)影響，從速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生原理及腸道黏膜屏障功能的角度去探討雙歧桿菌對(duì)OVA致敏大鼠腸道黏膜的保護(hù)作用，為應(yīng)用益生菌二級(jí)預(yù)防食物過(guò)敏提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究并探討其保護(hù)腸道黏膜屏障的機(jī)制。 對(duì)象:3周齡Sprague Oawley(SD)大鼠，隨機(jī)分為三組，分別為常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、雙歧桿菌組。 方法:

3、1.大鼠常規(guī)無(wú)雞蛋飼料喂養(yǎng)，雙歧桿菌組每天用雙歧桿菌0.75g加入無(wú)菌稀釋液10ml中，按照1.5mg／g灌胃3周；陽(yáng)性對(duì)照組和正常對(duì)照組直接用無(wú)菌稀釋液灌胃3周。 2.卵清蛋白腹腔注射建立食物致敏模型(正常對(duì)照組除外)，于灌胃3周后開(kāi)始。第1天使用含10 ug OVA及1mg AL(OH)3的無(wú)菌生理鹽水(normal saline，NS)0.5ml腹腔注射進(jìn)行基礎(chǔ)致敏，第15天使用含10 ug OVA的無(wú)菌NS 0.5ml腹

4、腔注射進(jìn)行強(qiáng)致敏，強(qiáng)化致敏后第5日、9日、13日、15日以含OVA 500ug無(wú)菌NS 0.5ml灌胃對(duì)大鼠進(jìn)行激發(fā)，共4次。正常對(duì)照組按照以上時(shí)間使用無(wú)菌NS假致敏及假?gòu)?qiáng)化。 3.留取24小時(shí)尿液檢測(cè)乳果糖與甘露醇的比值。最后一次激發(fā)前一天使用的乳果糖(lactulose，L)(500mg／只)、甘露醇(mannitol，M)(100mg／只)灌胃，留取灌胃后24小時(shí)尿液，用高效液相色譜儀(high presser liqui

5、d chromatography，HPLC)檢測(cè)各組大鼠尿液中L與M的濃度并計(jì)算其比值(L／M)。 4.最后一次激發(fā)1小時(shí)后處死大鼠，取大鼠小腸組織HE染色進(jìn)行觀察腸黏膜，甲苯胺蘭染色行肥大細(xì)胞完整性評(píng)估，并采用透射電鏡觀察腸黏膜超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果: 1.雙歧桿菌組24小時(shí)尿中乳果糖與甘露醇的比值(0.068±0.008)低于陽(yáng)性對(duì)照組(0.131±0.012)(P<0.05)，但高于正常對(duì)照組(0.027±0.0

6、04)(P<0.05)。 2.光鏡HE染色下腸黏膜組織形態(tài)學(xué)改變以表皮損傷積分(epithelial damage scoring，EDS)評(píng)估，雙歧桿菌組腸道黏膜部分表皮細(xì)胞受損(P50=1.3)，陽(yáng)性對(duì)照組大部分表皮細(xì)胞受損、脫落(P50=2.0)，正常對(duì)照組表皮細(xì)胞完整(P50=1.0)；電鏡下雙歧桿菌組腸道黏膜小腸絨毛完整，排列較整齊，局部線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無(wú)明顯擴(kuò)張，陽(yáng)性對(duì)照組小腸絨毛出現(xiàn)稀疏、脫落，甚至溶解等炎癥改變

7、，細(xì)胞連接模糊，線粒體廣泛腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，粗而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒，正常對(duì)照組小腸絨毛完整，排列整齊，細(xì)胞連接完整，線粒體無(wú)水腫，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無(wú)擴(kuò)張。 雙歧桿菌組腸道黏膜形態(tài)破壞明顯輕于陽(yáng)性對(duì)照組，但較正常對(duì)照組損傷重。 3.甲苯胺藍(lán)染色下可見(jiàn)雙歧桿菌組大鼠小腸黏膜固有層肥大細(xì)胞大部分未脫顆粒，少見(jiàn)聚集現(xiàn)象，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠小腸肥大細(xì)胞聚集，多數(shù)肥大細(xì)胞胞膜破裂，向外排顆粒，正常對(duì)照組大鼠小腸固有層肥大細(xì)胞胞膜完整，輪廓清晰，無(wú)脫顆粒，無(wú)聚集