三維培養(yǎng)體系下Aurora-A激酶促乳腺永生細(xì)胞MCF-10A惡性轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、目的：研究Aurora-A激酶對(duì)乳腺永生化細(xì)胞MCF-10A的惡性轉(zhuǎn)化作用及轉(zhuǎn)移能力的影響，初步探討Aurora-A對(duì)三維培養(yǎng)體系下的乳腺永生化細(xì)胞的影響；為深入認(rèn)識(shí)Aurora-A激酶的作用、三維培養(yǎng)體系在腫瘤研究的作用提供一定的證據(jù)。 方法：用逆轉(zhuǎn)錄病毒法轉(zhuǎn)染MCF-10A細(xì)胞株，通過(guò)藥物篩選，獲得穩(wěn)定高表達(dá)Aurora-A的MCF-10A細(xì)胞株，用Western印跡法檢測(cè)Aurora-A表達(dá)情況。用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)Auror

2、a-A高表達(dá)對(duì)MCF-10A細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；用間接免疫熒光法在激光共聚焦顯微鏡下觀察三維培養(yǎng)體系中Aurora-A高表達(dá)對(duì)MCF-10A細(xì)胞增殖、凋亡的影響；觀察細(xì)胞極性變化；用遷移實(shí)驗(yàn)研究Aurora-A對(duì)MCF-10A細(xì)胞遷移能力的影響。 結(jié)果：用逆轉(zhuǎn)錄的方法通過(guò)藥物篩選，我們獲得了穩(wěn)定高表示Aurora-A的MCF-10A細(xì)胞株；用細(xì)胞計(jì)數(shù)和間接免疫熒光法都證實(shí)Aurora-A激酶在二維和三維培養(yǎng)體系中都促進(jìn)MCF-10A

3、細(xì)胞的增殖；在三維培養(yǎng)體系中Aurora-A對(duì)細(xì)胞凋亡也起促進(jìn)作用；但Aurora-A對(duì)MCF-10A細(xì)胞的增殖作用較凋亡作用明顯。高表達(dá)Aurora-A可以改變?nèi)S培養(yǎng)體系中的乳腺細(xì)胞極性，上皮細(xì)胞的極性蛋白分子表達(dá)分布發(fā)生改變，細(xì)胞間的粘附力減弱，細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)。 結(jié)論：Aurora-A激酶有促進(jìn)乳腺永生化細(xì)胞MCF-10A增殖的作用，在三維培養(yǎng)體系中Aurora-A促增殖和促凋亡作用是同時(shí)存在的，而且促增殖的作用較促凋