β-TCP三維共培養(yǎng)體系中血管化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】
　　本實(shí)驗(yàn)將使用兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與兔內(nèi)皮細(xì)胞作為血管化種子細(xì)胞，二者在體外培養(yǎng)、傳代、予以熒光蛋白標(biāo)記后，按一定的細(xì)胞比例與I型鼠尾膠原/纖維蛋白于多孔β-三磷酸鈣（β-tricalciumphosphate，β-TCP）材料支架混合，并固定于兔股骨缺損處，飼養(yǎng)一段時(shí)間后對兔進(jìn)行灌注并取材，評估在β–TCP骨組織材料中不同細(xì)胞比率的成血管趨勢及對骨組織修復(fù)的影響。
　　【方法】
　?。?）使用慢病毒攜帶增強(qiáng)

2、型綠色熒光蛋白于體外轉(zhuǎn)染標(biāo)記兔內(nèi)皮細(xì)胞，使用慢病毒攜帶紅色熒光蛋白于體外轉(zhuǎn)染標(biāo)記兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。（2）制備I型鼠尾膠原/纖維蛋白。（3）培養(yǎng)箱孵育后第7d使用激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察在鼠尾膠原/纖維蛋白支架中的類血管狀結(jié)構(gòu)的生成。并利用MetaXpress軟件系統(tǒng)中血管生成分析模塊（Angiogenesis）分析比較3種不同細(xì)胞比例下生成的類血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的長度值。（4）分別按3種不同細(xì)胞比例與I型鼠尾膠原/纖維蛋白于多孔β–TCP

3、材料支架混合，并固定于兔骨缺損處。(5)飼養(yǎng)4、8、16周時(shí)使用X線了解成骨情況。（6）16周后對兔使用造影劑灌注并取出股骨，使用micro-CT掃描并評估新生血管形成情況后進(jìn)行切片、染色，并評估各比例組中新生血管及骨組織形成程度。
　　【結(jié)果】
　　該實(shí)驗(yàn)建立的Ⅰ型鼠尾膠原三維共培養(yǎng)體系是可行的，兔內(nèi)皮細(xì)胞和兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在該共培養(yǎng)體系內(nèi)相互連接、反應(yīng)及成血管狀結(jié)構(gòu)。兔內(nèi)皮細(xì)胞∶兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞=4:1時(shí)，于體外及