復(fù)方苦參止癢液的制備工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、復(fù)方苦參止癢液處方為我院中醫(yī)科邢彥軍主任的經(jīng)驗(yàn)方，臨床療效顯著。本品是由苦參、黃連、蛇床子等十余味中藥制成的外用制劑，對(duì)各種病原體所致的外陰炎和陰道炎有較好的治療作用。為了將該藥物更好的應(yīng)用于臨床并便于儲(chǔ)運(yùn)與使用，參照中藥研究的指導(dǎo)原則，研究了本品的制備工藝。 目的：通過(guò)設(shè)計(jì)工藝路線，進(jìn)行工藝方法和條件的篩選，制定出方法簡(jiǎn)便，條件確定的穩(wěn)定工藝，以優(yōu)選復(fù)方苦參止癢液的最佳提取工藝與制備方法。 方法：采用正交試驗(yàn)篩選提取工

2、藝。以加水量(A)、浸泡時(shí)間(B)、提取時(shí)間(C)作為考察因素，以總揮發(fā)油的收集量為指標(biāo)，優(yōu)選蛇床子、花椒、莪術(shù)中的揮發(fā)油提取工藝。以加水量(A)、煎煮時(shí)間(B)、煎煮次數(shù)(C)及醇沉濃度(D)作為考察因素，以苦參堿為量化指標(biāo)，優(yōu)選最佳水提取乙醇沉淀工藝。以ZTC1+1澄清劑的用量(A)、藥液濃度(B)、反應(yīng)溫度(C)、攪拌速度(D)及時(shí)間(E)5個(gè)因素作為考察因素，優(yōu)選出最佳水提取澄清劑沉淀工藝。比較最佳水醇法工藝與最佳澄清劑法工藝，

3、以苦參堿和蛇床子素含量為指標(biāo)，優(yōu)選出最合適的精制工藝。 結(jié)果：通過(guò)正交試驗(yàn)篩選的最佳制備工藝條件為：(1)揮發(fā)油的提?。荷叽沧?、花椒、莪術(shù)加14倍量水，浸泡0.5小時(shí)，提取7小時(shí)。(2)水醇法工藝的最佳條件為：加12倍水，煎煮2次，每次2小時(shí)，醇沉濃度為80％。(3)吸附澄清劑法工藝的最佳條件為：澄清劑用量為8％，藥液濃度為1:6，反應(yīng)溫度為60-80℃，攪拌速度為100r·min-1，攪拌時(shí)間為30min。(4)最佳精制工藝為

4、：吸附澄清劑法。 結(jié)論：通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選出了最佳的復(fù)方苦參止癢液的制備工藝，該制備工藝穩(wěn)定。 藥品的質(zhì)量關(guān)系到人民的健康，也關(guān)系到藥品本身的生存與發(fā)展。專屬性強(qiáng)，簡(jiǎn)便且行之有效的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)是保證藥品質(zhì)量的依據(jù)，因此，確定復(fù)方苦參止癢液的薄層鑒別和含量測(cè)定方法將為復(fù)方苦參止癢液的質(zhì)量控制提供分析方法和理論依據(jù)，具有重要意義。 目的：利用薄層色譜法對(duì)復(fù)方苦參止癢液處方中蛇床子、苦參、黃連進(jìn)行定性鑒別；建立復(fù)方苦參止癢液

5、中蛇床子素、苦參堿、小檗堿的高效液相色譜含量測(cè)定方法。 方法：1.鑒別方法的研究：采用薄層色譜法，選用合適的提取溶劑和方法，找到最適宜的固定相、展開(kāi)系統(tǒng)、顯色系統(tǒng)等，對(duì)處方中的主藥蛇床子、苦參、黃連進(jìn)行鑒別。 2。蛇床子素、苦參堿的含量測(cè)定：①提?。喝∵m量復(fù)方苦參止癢液，用氨試液調(diào)PH值，置分液漏斗中用氯仿萃取，水浴揮干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇定容，搖勻，離心，上清液作為供試品溶液。②色譜條件：選擇合適的固定相，調(diào)整流動(dòng)相的組成

6、、配比、流速以使蛇床子素和苦參堿的峰與其它峰完全分離。③系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在已確定的色譜條件下，考察蛇床子素及苦參堿的分離度、理論板數(shù)、對(duì)稱度。④標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制系列濃度的蛇床子素和苦參堿對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以蛇床子素對(duì)照品溶液進(jìn)樣量、苦參堿對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。⑤最低檢測(cè)限試驗(yàn)：逐步稀釋對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，直至色譜峰的峰高為噪聲的三倍。⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液分別放置0，2，4，

7、6，8，24h后，按已確定的色譜條件測(cè)定峰面積。⑦精密度試驗(yàn)：取復(fù)方苦參止癢液，制備供試品溶液，按已確定的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。⑧重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品5份，制備供試品溶液后，測(cè)定蛇床子素和苦參堿的含量。⑨加樣回收率試驗(yàn)：依次取樣品溶液適量，加入蛇床子素和苦參堿，測(cè)定它們的含量。3.小檗堿的含量測(cè)定：①提?。壕芰咳?fù)方苦參止癢液于容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻后微孔濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液做為供試品溶液。②色譜條件：選擇合適的固定

8、相，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速以使小檗堿的峰與其它峰完全分離。⑧系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在已確定的色譜條件下，考察小檗堿的分離度、理論板數(shù)、對(duì)稱度。④標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制系列濃度的小檗堿對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以小檗堿對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。⑤最低檢測(cè)限試驗(yàn)：逐步稀釋對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，直至色譜峰的峰高為噪聲的三倍。⑤穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液分別放置0，2，4，6，8，24h后，按已確定的色譜條件測(cè)定

9、峰面積：⑦精密度試驗(yàn)：取復(fù)方苦參止癢液，制備供試品溶液，按已確定的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。⑨重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品5份，制備供試品溶液后，測(cè)定小檗堿的含量。⑨加樣回收率試驗(yàn)：依次取樣品溶液適量，加入小檗堿，測(cè)定小檗堿的含量。 結(jié)果：1.鑒別方法的研究：蛇床子，采用相應(yīng)的薄層鑒別方法，薄層展開(kāi)后均顯示與對(duì)照藥材相同的特異性斑點(diǎn)，分離效果好。苦參，采用相應(yīng)的薄層鑒別方法，薄層展開(kāi)后均顯示與對(duì)照藥材相同的特異性斑點(diǎn)，分離效果

10、好。 黃連，采用相應(yīng)的薄層鑒別方法，薄層展開(kāi)后均顯示與對(duì)照藥材相同的特異性斑點(diǎn)，分離效果好。 2.蛇床子素、苦參堿的含量測(cè)定：①提?。喝?fù)方苦參止癢液，用氨試液調(diào)節(jié)PH值，置分液漏斗中，用氯仿萃取，置水浴揮干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解并定容容量瓶中，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。②最佳色譜條件：以十八烷基硅烷化硅膠(ODS)為固定相，以甲醇－水－二乙胺(70：30:0.02)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速為1.0m

11、l.·min-1，柱溫33℃，進(jìn)樣量為20μL。③系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：在上述色譜條件下，蛇床子素和苦參堿的峰形良好，無(wú)雜質(zhì)峰干擾，其理論板數(shù)以蛇床子素計(jì)不低于2500，對(duì)稱因子為1.05，保留時(shí)間為6min左右，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5；以苦參堿計(jì)不低于1000，對(duì)稱因子為0.98，保留時(shí)間為3min左右，與相鄰色譜峰的分離度為大于1.5；④標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：蛇床子素進(jìn)樣量在0.22～1.1μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，回歸方程

12、為Y=384605X-209951，相關(guān)系數(shù)r=0.9990(n=5)?？鄥A進(jìn)樣量在2.12～10.6μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=906475X+1E+06，相關(guān)系數(shù)r=0.9993(n=5)。⑤苦參堿的最低檢測(cè)限為：10ng。⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)：樣品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。⑦精密度試驗(yàn)：重復(fù)進(jìn)樣5次后，蛇床子素峰面積的RSD為1.47％和苦參堿峰面積的RSD為0.87％。⑧重復(fù)性試驗(yàn)：蛇床子素的含量為0.093(mg·

13、(10ml)-1)，苦參堿的含量為4.020(mg·(10ml)-1)，重復(fù)性良好。⑨加樣回收率試驗(yàn)：樣品的平均加樣回收率分別為蛇床子素97.8％、苦參堿99.09％，RSD分別為蛇床子素2.97％、苦參堿0.51％。 3.小檗堿的含量測(cè)定：①提?。壕芰咳?fù)方苦參止癢液于容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻后微孔濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液做為供試品溶液。②最佳色譜條件：以十八烷基硅烷化硅膠(ODS)為固定相，以乙腈-0.1％磷酸(48:52，每100

14、ml流動(dòng)相中含0.1g十二烷基磺酸鈉)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為365nm，流速為0.8ml·min-1，柱溫30℃，進(jìn)樣量為20μL。③系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：在上述色譜條件下，鹽酸小檗堿的峰形良好，無(wú)雜質(zhì)峰干擾，其理論板數(shù)以鹽酸小檗堿計(jì)不低于1000，對(duì)稱因子為1.05，保留時(shí)間為11min左右，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5；④標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.2～1μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=278330X-997

15、74，相關(guān)系數(shù)r=0.9992(n=5)。⑤最低檢測(cè)限為：2.0ng。⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)：樣品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。⑦精密度試驗(yàn)：重復(fù)進(jìn)樣5次后，鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.58％。⑧重復(fù)性試驗(yàn)：鹽酸小檗堿的含量為0.2479mg·m1-1，重復(fù)性良好。⑨加樣回收率試驗(yàn)：樣品的平均加樣回收率為97.81％，RSD為1.25％。 結(jié)論：1.苦參、蛇床子、黃連的鑒別方法分離度好，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，可作為復(fù)方苦參止癢液的鑒別方法。