鹽漬腸衣豬瘟病毒的實(shí)驗室檢測研究.pdf

1、本研究參考GenBank中發(fā)表的豬瘟病毒(CSFV)序列，設(shè)計一對CSFV特異性引物，建立了檢測CSFV的快速、敏感、特異的RT-PCRELISA方法。在RT-PCR過程中以地高辛標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記PCR產(chǎn)物，用生物素標(biāo)記的捕獲探針在鏈親和素包被微量板孔中雜交捕獲PCR產(chǎn)物。該方法的敏感性較常規(guī)RT-PCR方法高100倍，可檢測出600μL1∶100(相當(dāng)于6.0mg)的腸衣組織中的CSFV，特異性強(qiáng)，避免了PCR過

2、程中因污染導(dǎo)致的假陽性結(jié)果。通過對RT-PCR和微量雜交系統(tǒng)的條件優(yōu)化，該方法檢測了40例腸衣樣品豬瘟病毒；同時用RT-PCR、抗原捕獲ELISA和兔體交叉實(shí)驗作為對照，檢測四者的符合性。RT-PCRELISA、RT-PCR和抗原捕獲ELISA的檢測結(jié)果一致，而兔體交叉反應(yīng)試驗的陽性檢出率為上述三者的66.7﹪，表明RT-PCRELISA和RT-PCR技術(shù)均能應(yīng)用于鹽漬豬腸衣CSFV快速、簡便的檢測。 同時，本研究通過用RT-P

3、CRELISA、RT-PCR、抗原捕獲ELISA和兔體交叉實(shí)驗對鹽漬了7d、15d、30d、60d、90d的陽性腸衣進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：鹽漬時間達(dá)3個月后仍可用RT-PCRELISA、RT-PCR和抗原捕獲ELISA進(jìn)行檢測，鹽漬腸衣豬瘟病毒陽性檢出率均為100﹪。但鹽漬后豬瘟病毒免疫原性和感染性存在明顯差異。而兔體交叉實(shí)驗只能對15d的進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果與上述三種方法一致，但30d后檢測其陽性檢出率為0，不能用于鹽漬腸衣豬瘟病毒的檢測