鹽漬腸衣豬瘟病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)研究.pdf

1、本研究參考GenBank中發(fā)表的豬瘟病毒(CSFV)序列，設(shè)計(jì)一對(duì)CSFV特異性引物，建立了檢測(cè)CSFV的快速、敏感、特異的RT-PCRELISA方法。在RT-PCR過(guò)程中以地高辛標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記PCR產(chǎn)物，用生物素標(biāo)記的捕獲探針在鏈親和素包被微量板孔中雜交捕獲PCR產(chǎn)物。該方法的敏感性較常規(guī)RT-PCR方法高100倍，可檢測(cè)出600μL1∶100(相當(dāng)于6.0mg)的腸衣組織中的CSFV，特異性強(qiáng)，避免了PCR過(guò)

2、程中因污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性結(jié)果。通過(guò)對(duì)RT-PCR和微量雜交系統(tǒng)的條件優(yōu)化，該方法檢測(cè)了40例腸衣樣品豬瘟病毒；同時(shí)用RT-PCR、抗原捕獲ELISA和兔體交叉實(shí)驗(yàn)作為對(duì)照，檢測(cè)四者的符合性。RT-PCRELISA、RT-PCR和抗原捕獲ELISA的檢測(cè)結(jié)果一致，而兔體交叉反應(yīng)試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率為上述三者的66.7﹪，表明RT-PCRELISA和RT-PCR技術(shù)均能應(yīng)用于鹽漬豬腸衣CSFV快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)。 同時(shí)，本研究通過(guò)用RT-P

3、CRELISA、RT-PCR、抗原捕獲ELISA和兔體交叉實(shí)驗(yàn)對(duì)鹽漬了7d、15d、30d、60d、90d的陽(yáng)性腸衣進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明：鹽漬時(shí)間達(dá)3個(gè)月后仍可用RT-PCRELISA、RT-PCR和抗原捕獲ELISA進(jìn)行檢測(cè)，鹽漬腸衣豬瘟病毒陽(yáng)性檢出率均為100﹪。但鹽漬后豬瘟病毒免疫原性和感染性存在明顯差異。而兔體交叉實(shí)驗(yàn)只能對(duì)15d的進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與上述三種方法一致，但30d后檢測(cè)其陽(yáng)性檢出率為0，不能用于鹽漬腸衣豬瘟病毒的檢測(cè)