抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬的初步研究.pdf

1、豬瘟(ClassicalSwineFever，CSF)是一種由豬瘟病毒(ClassicalSwineFevervirus，CSFV)引起的急性、熱性和高度接觸性的傳染病，流行廣泛，發(fā)病率及死亡率高，危害極大，給養(yǎng)豬業(yè)尤其規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將本病列入A類法定傳染病，在我國(guó)制定的《家畜家禽防疫條例實(shí)施細(xì)則》中也被列為一類傳染病。因此加快抗豬瘟病毒豬新品種的培育研究，控制豬瘟病毒的廣泛傳播具有重大的現(xiàn)實(shí)意

2、義，本研究通過(guò)精子介導(dǎo)法成功構(gòu)建出抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬。
　　 研究一:本研究旨在為構(gòu)建抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因克隆胚胎建立供核細(xì)胞系和基因轉(zhuǎn)染體系，為抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因克隆豬的研究提供參考。取體長(zhǎng)10-15cm的大白豬胚胎，采用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大白豬胎兒成纖維細(xì)胞(Porcinefetusfibroblasts，PFF)，脂質(zhì)體介導(dǎo)法將含有抗豬瘟病毒基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞中，探索影響pGPH1/GFP/Neo質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染

3、豬胎兒成纖維細(xì)胞的最佳條件。結(jié)果顯示，2.5μl脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染1.2μg質(zhì)粒DNA6h轉(zhuǎn)染率最高32.5％。但是超過(guò)上述脂質(zhì)體用量和質(zhì)粒DNA濃度以及轉(zhuǎn)染時(shí)間，轉(zhuǎn)染率反而降低，引起細(xì)胞的皺縮及死亡。本研究成功建立了豬胎兒成纖維細(xì)胞系，并有效轉(zhuǎn)染了含有抗豬瘟病毒基因的重組pGPH1/GFP/NeoDNA，優(yōu)化了轉(zhuǎn)染條件，獲得了轉(zhuǎn)抗豬瘟病毒基因的供核細(xì)胞。
　　 研究二:本研究旨在利用精子介導(dǎo)法構(gòu)建抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬，為抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因