豬瘟病毒非編碼區(qū)結(jié)構(gòu)功能研究.pdf

1、豬瘟（Classical swine fever, CSF）是一種高傳染性、高致病性和高致死率的病毒性傳染病，危害豬和野豬。豬瘟因其發(fā)病特點(diǎn)，給許多國家的養(yǎng)豬業(yè)都造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失，因此豬瘟被世界動物衛(wèi)生組織列為A類法定傳染病。
　　豬瘟是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）引起的一種病毒性傳染病，該病毒是黃病毒科、瘟病毒屬的一員。CSFV是一種單股正鏈的RNA病毒，外層有囊膜結(jié)構(gòu)，病

2、毒粒子直徑為40~60 nm，其基因組大小約為12.3 kb。CSFV基因組結(jié)構(gòu)主要由三部分組成，依次為5’非編碼區(qū)（5’untranslated region,5’UTR）、能夠編碼約3900個氨基酸殘基的多聚蛋白的開放閱讀框（ORF）和3’非編碼區(qū)（3’untranslated region,3’UTR）。其中，5’UTR和3’UTR在病毒基因組RNA復(fù)制和翻譯中都起到了重要的作用。
　　將CSFV強(qiáng)毒株Shimen株和弱毒株

3、HCLV進(jìn)行序列比對，發(fā)現(xiàn)弱毒株HCLV在3’UTR的58到69位點(diǎn)之間插入了12個核苷酸序列，這是造成CSFV毒力強(qiáng)弱的一個重要因素。在本實(shí)驗(yàn)中，用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)進(jìn)行CSFV非編碼區(qū)結(jié)構(gòu)功能的研究。分別構(gòu)建了Shimen株和HCLV株的5’UTR和3’UTR調(diào)節(jié)的熒光素酶表達(dá)載體，并進(jìn)行比對分析。結(jié)果顯示，弱毒株HCLV的5’UTR和3’UTR對熒光素酶表達(dá)抑制作用不及強(qiáng)毒株Shimen，說明CSFV毒性的強(qiáng)弱確實(shí)與非編碼

4、區(qū)相關(guān)。
　　為了研究CSFV3’UTR在調(diào)節(jié)豬瘟病毒翻譯過程中的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)對3’UTR進(jìn)行了一系列的截短研究。發(fā)現(xiàn)其抑制翻譯作用的區(qū)域主要位于核苷酸80-106區(qū)間，該區(qū)域富含AU，即ARE結(jié)構(gòu)域。通過生物信息技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，在ARE下游的112-139位點(diǎn)有潛在的microRNA ssc-let-7結(jié)合處。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，單獨(dú)的ssc-let-7結(jié)合區(qū)不能對3’UTR產(chǎn)生明顯的抑制作用，但ARE-let7對3’UTR的抑制效

5、果會顯著增強(qiáng)，說明ssc-let-7可能只有在ARE存在的情況下，才能有協(xié)同抑制豬瘟病毒翻譯的作用。
　　由于ARE缺失會增強(qiáng)3’UTR的抑制作用，暗示宿主細(xì)胞中有些蛋白結(jié)合于此處調(diào)節(jié)豬瘟病毒的翻譯，降低ARE區(qū)對病毒翻譯的抑制。本研究表明HuR就是這樣一種蛋白。當(dāng)HuR蛋白過表達(dá)時(shí)，ARE對翻譯的抑制效果明顯減弱。反之，當(dāng)把HuR蛋白干涉后，發(fā)現(xiàn)ARE對熒光素酶的表達(dá)的抑制作用增強(qiáng)。由此可知，宿主細(xì)胞中的HuR與CSFV3’UT