應用腫瘤相關cDNA芯片篩查卵巢癌相關基因的初步研究.pdf

1、近年來發(fā)展起來的基因芯片技術具有高通量、并行性的特點，可以快速、準確的檢測大量基因，在分析疾病相關基因方面具有極大的優(yōu)勢?；蛐酒夹g可分析樣本的基因表達特征，如腫瘤和正常組織的差別、轉移灶與原發(fā)灶的差別以及不同病理類型的差別，尋找發(fā)生明顯變化的基因和各種表達差異基因之間的關系，利于研究腫瘤的發(fā)生和進展機制，為指導治療和預后監(jiān)測提供線索。 盡管目前應用基因芯片技術篩查卵巢癌相關基因已有報道，但一般病例數(shù)很少，所得結果的代表性不強

2、；或僅限于“發(fā)現(xiàn)”差異表達的基因，但對于基因的闡述和認識不足，缺乏一種綜合性的分析；并且大多數(shù)研究應用的是市售的芯片，相對于腫瘤來講針對性不強。針對這種情況，通過查閱文獻，從國外購進特異性的克隆后自行構建了腫瘤相關的cDNA芯片，應用這種芯片篩選了14例卵巢癌患者的16例標本，將發(fā)生半數(shù)以上差異性表達的基因列表分析，并將部分基因按功能分類闡述其變化趨勢，同時重點分析了1例顆粒細胞瘤和1例未成熟畸胎瘤和2例卵巢上皮癌癌旁組織的差異表達基因

3、。期望得到有關卵巢癌發(fā)生和進展的分子生物學基礎，為疾病的靶向治療和預后監(jiān)測等提供理論參考。 目的： 應用實驗室自主構建的腫瘤相關cDNA芯片篩查卵巢癌相關基因，探討卵巢癌發(fā)生和進展的分子機制，聯(lián)系不同病理類型進行分析，為臨床治療和預后監(jiān)測提供參考。 方法： 1.自行構建包含2560個點陣的腫瘤相關cDNA芯片。 2.標本18份，正常卵巢2例，卵巢漿液性乳頭狀癌12例加癌旁組織2例，顆粒細胞瘤1例，

4、未成熟畸胎瘤1例。提取腫瘤組織與正常卵巢組織總RNA，反轉錄后標記為cDNA探針，與芯片雜交后經(jīng)掃描獲取圖象，應用Quantarray3.0軟件分析，得到基因表達的數(shù)據(jù)資料。應用半定量RT-PCR方法對cDNA芯片檢測到的某些差異表達基因進行驗證。 結果： 1.自制的包含2560個基因點陣的cDNA芯片，實驗證實標本與芯片雜交結果良好，掃描圖象信號清晰，背景信噪低，重復性好。 2.16例標本，發(fā)生半數(shù)以上差異表達

5、的基因101個，上調基因35個，下調基因66個。將基因按照功能分為：(1)代謝相關酶類基因；(2)癌基因和抑癌基因；(3)黏附分子基因；(4)蛋白酶及其抑制劑基因；(5)生長因子及其受體基因；(6)凋亡及增殖相關基因；(7)熱休克蛋白；(8)細胞周期蛋白相關基因。分別匯總闡述。在1例卵巢顆粒細胞瘤中，特異性上調的基因包括角蛋白17、胰島素樣生長因子、S100鈣結合蛋白A4、IL24、G蛋白、自嗜基因、鋅指蛋白以及3個EST(表達序列標簽

6、)；在1例未成熟畸胎瘤中，層粘連蛋白和一種普遍存在的微管蛋白α的基因的表達明顯降低；卵巢上皮性癌癌旁組織2例中，特異性上調基因包括nm23-H8、類肝素酶、血影蛋白等。 3.用半定量RT-PCR驗證了MMP9基因的表達特征與芯片檢測結果一致。 結論： 1.cDNA芯片技術可以快速、系統(tǒng)、準確地揭示基因的表達特征，為研究卵巢癌的發(fā)生和進展相關基因提供了良好工具。 2.通過研究正常卵巢和腫瘤之間、不同病理類型