尾靜脈液壓法基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)的建立及應(yīng)用.pdf

1、尾靜脈大容量快速注射裸DNA能夠介導(dǎo)外源基因在動(dòng)物肝內(nèi)高效表達(dá),該文首先以凝血因子Ⅸ(hFⅨ)為報(bào)告基因建立了尾靜脈液壓法裸質(zhì)粒轉(zhuǎn)移體系.hFⅨ表達(dá)質(zhì)粒pCMV-hFⅨ 2.2ml7秒內(nèi)注射到小鼠體內(nèi),hFⅨ在小鼠體內(nèi)高水平表達(dá),注射后1天平均為2.5μg/ml血漿,此后開(kāi)始逐漸下降.PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)小鼠多種器官中存在hFⅨ cDNA,RT-PCR和免疫組化切片檢測(cè)表明hFⅨ mRNA和蛋白主要在肝臟中表現(xiàn).轉(zhuǎn)氨酶水平與病理切片檢測(cè)表明注

2、射1天后5％的肝臟細(xì)胞受到損傷,但在3天至10天內(nèi)完全恢復(fù).Ⅰ型糖尿病治療中胰島素基因轉(zhuǎn)移和表達(dá)是提高血糖控制的重要策略.尾靜脈液壓法可將裸DNA高效轉(zhuǎn)移到小鼠肝臟中,該文研究了這種快速尾靜脈注射法介導(dǎo)的肝臟胰島素表達(dá)對(duì)Ⅰ型糖尿病血糖控制的恢復(fù)效果.遺傳工程改造后的胰島素cDNA插入CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)的質(zhì)粒中,通過(guò)尾靜脈液壓法注射到STZ誘導(dǎo)的Ⅰ型糖尿病模型小鼠體內(nèi),檢測(cè)小鼠體重變化、胰島素水平、肝臟免疫組化、胰島素DNA和mRNA等

3、,同時(shí)也研究了質(zhì)粒注射后糖尿病小鼠的葡萄糖耐受能力.實(shí)驗(yàn)還采用了轉(zhuǎn)座元系統(tǒng)來(lái)延長(zhǎng)肝臟中胰島素的表達(dá).結(jié)果質(zhì)粒注射后糖尿病小鼠血液中胰島素水平顯著升高,肝臟呈胰島素免疫學(xué)陽(yáng)性,同時(shí)高血糖有關(guān)癥狀得到改善,如血糖正?；?、葡萄糖耐受能力改善、體重減少癥狀改善等等.沒(méi)有糖尿病小鼠死于尾靜脈快速注射過(guò)程.我們的結(jié)果表明胰島素基因可以通過(guò)尾靜脈高壓注射高效轉(zhuǎn)移到糖尿病小鼠肝臟中,獲得高水平表達(dá).尾靜脈液壓法介導(dǎo)的肝臟基礎(chǔ)胰島素表達(dá)可顯著提高Ⅰ型糖尿