PRRSV熒光原位雜交檢測法的建立及臨床應(yīng)用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)以引起仔豬、保育豬呼吸系統(tǒng)障礙以及母豬繁殖障礙為特征，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV為單鏈RNA病毒，屬于動(dòng)脈炎病毒科，含有9個(gè)開放閱讀框。病毒主要分為兩個(gè)亞型:北美洲型VR-2332和歐洲型LV。2006年中國爆發(fā)了一場規(guī)模巨大的“豬高熱癥”，引起該病的病毒不同于之前的PRRSV，其致病力

2、強(qiáng)，以高熱、高致病性和高致死率為特征，經(jīng)過基因分析確定，這類型的病毒為VR-2332的變異毒株，又稱HP-PRRSV。HP-PRRSV病毒在Nsp2當(dāng)中相比于經(jīng)典株有90個(gè)堿基缺失，并且該突變能夠穩(wěn)定遺傳。
　　本實(shí)驗(yàn)首先利用HuN4毒株通過滴鼻的方法感染仔豬，建立病毒模型。在第5、7、14天分別剖殺實(shí)驗(yàn)組與對照組樣本，固定組織，制成石蠟切片。通過HE染色與免疫熒光組織化學(xué)法觀察組織學(xué)變化，檢測病毒分部。分析Nsp2上穩(wěn)定的序列合

3、成寡聚核苷酸熒光標(biāo)記探針，通過熒光原位雜交法檢測相應(yīng)組織樣品，并且對黑龍江地區(qū)50個(gè)病例進(jìn)行檢查。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，機(jī)體肺臟以及淋巴結(jié)最先出現(xiàn)病變。肺部出血、水腫、充血嚴(yán)重，出現(xiàn)實(shí)變和壞死灶，淋巴結(jié)水腫至正常的2-10倍，出現(xiàn)針尖樣出血。肝臟和脾臟出現(xiàn)不同程度的水腫和出血。腎臟腫脹或者萎縮，有出血點(diǎn)。組織學(xué)觀察可看到典型的間質(zhì)性肺炎，淋巴結(jié)和脾臟淋巴細(xì)胞大量減少并且壞死，可觀察到大量巨噬細(xì)胞，有單核細(xì)胞和炎性細(xì)胞的浸潤。免疫熒光

4、組織化學(xué)可觀察病毒在機(jī)體各個(gè)器官的分布規(guī)律，結(jié)果表明感染第五天，可在淋巴結(jié)和肺臟、脾臟檢測到陽性信號，第七天可從腎臟、肝臟看到明顯病毒顆粒，但是信號較少。心臟、胰腺在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中均呈現(xiàn)出陰性反應(yīng)。
　　應(yīng)用熒光原位雜交法檢測各個(gè)組織，結(jié)果顯示陽性信號主要分布于肺臟的肺泡間隔當(dāng)中的巨噬細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞，淋巴結(jié)當(dāng)中的淋巴小結(jié)以及脾臟當(dāng)中的淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞。肝臟陽性信號主要出現(xiàn)于竇狀隙，腎臟主要分布于腎小球以及腎間質(zhì)。