草莓高頻再生系統(tǒng)的建立及果聚糖果糖基轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本研究以全明星草莓(Allstar)為試材，建立草莓葉片高頻再生體系，比較了不同因素對(duì)草莓葉片再生能力的影響。利用農(nóng)桿菌LBA4404(pTSB)介導(dǎo)轉(zhuǎn)化，獲得了草莓轉(zhuǎn)果聚糖果糖基轉(zhuǎn)移酶(fructanfructosyltransferase)基因植株，并對(duì)影響外植體轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行了探討。轉(zhuǎn)化植株在Km90mg/L生根培養(yǎng)基中生根良好，PCR結(jié)果呈陽(yáng)性，初步證明目的基因已經(jīng)整合到草莓基因組中?？箖鲈囼?yàn)、葉片電導(dǎo)率測(cè)定、多糖含量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)

2、結(jié)果證實(shí)果聚糖果糖基轉(zhuǎn)移酶在草莓轉(zhuǎn)化植株中已實(shí)現(xiàn)表達(dá)。具體工作如下： (1)草莓組織培養(yǎng)和高頻再生體系的建立。選用草莓葉片和莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)、誘導(dǎo)再生，得到了以葉片為外植體的最適分化培養(yǎng)基為：TDZ1.0mg/L+NAA0.05mg/L+IAA0.2mg/L+GA0.25mg/L，分化率可達(dá)81.82﹪；生根培養(yǎng)基為MS0。 (2)在建立了草莓高頻轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，利用農(nóng)桿菌LBA4404(pTSB)進(jìn)行轉(zhuǎn)化研究。從

3、工程菌的活化狀態(tài)、侵染時(shí)間等方面闡述了草莓基因轉(zhuǎn)化中的影響因素。轉(zhuǎn)化植株在含Km90mg/L生根培養(yǎng)基中生根良好。PCR檢測(cè)表明，轉(zhuǎn)化植株的條帶和質(zhì)粒中的目的條帶一致，而未轉(zhuǎn)化植株沒有擴(kuò)增出任何條帶，說明外源基因已經(jīng)整合到草莓基因組上。 (3)進(jìn)行試管苗抗凍試驗(yàn)，-5℃時(shí)轉(zhuǎn)化植株和未轉(zhuǎn)化植株的生長(zhǎng)狀況表現(xiàn)出較大差異。轉(zhuǎn)化植株的抗凍能力提高。 (4)對(duì)植株的葉片進(jìn)行電導(dǎo)率測(cè)定，在一定低溫范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)化植株的電導(dǎo)率要明顯低于未