天舒浸膏對(duì)急性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用與機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的
　　 腦血管病是嚴(yán)重威脅人類尤其是中老年人健康的常見病、多發(fā)病，具有高發(fā)病率、高致殘率和高致死率，其中87％是缺血性腦血管病[1]。腦缺血再灌注損傷是缺血性梗死腦區(qū)在血液供應(yīng)恢復(fù)后出現(xiàn)的更嚴(yán)重的腦損傷，其損傷發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜，活性氧增多、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞損傷、鈣超載、細(xì)胞凋亡增加等多種因素均參與缺血再灌注損傷過程，抑制再灌注損傷是治療缺血性腦血管病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。盡管國內(nèi)外研究者對(duì)此進(jìn)行了大量的研究并取得一定進(jìn)展，但仍

2、缺乏有針對(duì)性的治療策略[2，3]。
　　 中醫(yī)藥治療缺血性腦血管病已有悠久的歷史，具有作用較強(qiáng)、副作用小、藥理作用廣泛等優(yōu)點(diǎn)，可以從多個(gè)層次和多個(gè)環(huán)節(jié)上起到治療作用，特別適合腦缺血所致的多種病理改變。長期臨床實(shí)踐中產(chǎn)生的腦缺血的經(jīng)典理論、中藥提取物和中藥復(fù)方日益引起國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注[4，5]。
　　 缺血性腦血管病與中醫(yī)血瘀證緊密相關(guān)，中醫(yī)治療多采用活血化瘀法，配伍理氣藥以行氣活血。在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下產(chǎn)生的中藥復(fù)方天舒

3、膠囊，其處方來源于宋代《圣濟(jì)總錄》中的大川芎方，應(yīng)用現(xiàn)代科技提取天麻、川芎的有效成分天麻素、川芎嗪精制而成，具有活血化瘀、平肝熄風(fēng)、通絡(luò)止痛等功效。中藥復(fù)方是針對(duì)某一病癥發(fā)揮藥效作用的全部活性藥效物質(zhì)總和，是中藥復(fù)方藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，正是多味藥物的組合構(gòu)成了中藥復(fù)方的多靶點(diǎn)效應(yīng)和協(xié)同作用[6]。而對(duì)于天舒膠囊，以往的文獻(xiàn)多關(guān)注于其對(duì)頭痛的治療，本課題擬初步觀察其對(duì)急性腦缺血損傷的保護(hù)作用，并進(jìn)一步探討其分子機(jī)制，以期為拓展天舒膠囊的臨床應(yīng)

4、用提供客觀理論依據(jù)。
　　 方法
　　 本課題采用SD成年雄性大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究短期天舒浸膏預(yù)處理對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)效應(yīng)及其分子機(jī)制。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、模型組(I/R)、天舒浸膏0.3g/kg/d、0.6g/kg/d、1.28/kg/d劑量組(TS0.3、TS0.6、TS1.2)，分別灌胃給予天舒浸膏和生理鹽水，每日1次，連續(xù)7天。末次灌胃給藥后2h根據(jù)改良的Zea-Longa[15]線

5、栓法制作大腦中動(dòng)脈栓塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，90min后實(shí)施再灌注。造模后24h觀察各組動(dòng)物的一般精神行為狀態(tài)及生存情況。采用TTC染色于缺血再灌注后24h計(jì)算腦梗死體積，同時(shí)測(cè)定腦組織含水量；參照改良神經(jīng)功能損害評(píng)分(modified Neurological Severity Scores，mNSS)于缺血再灌注后1d、3d、7d、14d進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分；并對(duì)腦組織進(jìn)

6、行灌流切片，采用HE、Nissl染色法觀察缺血再灌注后24h的腦組織損傷；應(yīng)用TUNEL法觀察缺血再灌注后1d梗死灶周的凋亡細(xì)胞數(shù)；采用ELISA法檢測(cè)再灌注24h磷酸肌酸激酶腦型同工酶(CK-BB)表達(dá)；采用Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的活性以及Bax/Bcl-2的表達(dá)。
　　 結(jié)果
　　 0.6-1.2g/kg/d天舒浸膏預(yù)處理組動(dòng)物次日精神狀態(tài)較好，對(duì)水和食物的攝取有較強(qiáng)的主動(dòng)性；能顯

7、著減少腦梗死體積，降低缺血再灌注損傷后的腦組織含水量；改善神經(jīng)功能缺損癥狀；血清CK-BB的水平顯著降低，減少細(xì)胞凋亡，抑制缺血后Bax表達(dá)上調(diào)和Bcl-2表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而調(diào)節(jié)Bax/Bcl-2表達(dá)比值，并抑制Caspase-3活性。
　　 結(jié)論
　　 天舒浸膏可能通過抑制腦缺血后的細(xì)胞凋亡，減少腦梗死體積，降低血清CK-BB水平，減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，機(jī)制與對(duì)Bax/Bcl-2比值的調(diào)節(jié)和對(duì)Caspase-