30040.枯草芽孢桿菌ncd2解磷相關基因的克隆及抑菌物質的分離鑒定_第1頁
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1、河北大學碩士學位論文枯草芽孢桿菌NCD2解磷相關基因的克隆及抑菌物質的分離鑒定姓名：李晶申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：馬平20090501AbstractAbstractBacillussubtilisstrainNCD。2wasisolatedfromtherhizosphereofcottonandshowedantagonismtoVerticilliumdahliaebysecretingantifungalactiv

2、ecompoundsT11isstrainalsoshowedlecithin—solubilizingabilityPlasmidpHV1249whichcarryingtransposonmini—TnJDWastransferredintostrainNCD2byelectrotransformation，andthetransposonlibraryofNCD2WasconstructedThreemutantswitlldef

3、ectiveoflecithinsolubilizingabilitywereselectedfrommorethan3000miniTnlOinsertedmutantsSouthernhybridization、加t11miniTnlOfragmentasaprobeshowedthatallthesemutantscontainedsinglecopytransposoninsertion，whichpossiblylocaliz

4、edatthesamechromosomallocationOnemutantM216WasusedforfurtherstudyTheflankingsequenceofinsertionsiteWasclonedfrommutantM216byNestPCRSequenceanalysisshowedthattheinsertedgenehasof98％identitywithphoRinBsubtilisstrain168Gene

5、ticcomplementationWasconductedbycloningphoRgeneintoplasmidpHY300PLKandtherecombinantplasmidwastransferredintomutantM216ThelecithinsolubilizingabilityofmutantM216wasrestoredResultssuggestedthatthelecithin—solubilizingabil

6、ityofNCD一2wasrelatedwithphoRgenePurificationandidentificationofantifungallipopeptidesproducedby丑subtil&NCD2WasalsostudiedinthisexperimentCrudelipopeptideswereextracted、析mmethanolfromtheprecipitate，whichWasobtainedbyaddin

7、g6mol／LHCltothecellfreeculturebrothandthenstoredat4“CovernightThecrudeextractshowedantifungaiactivitiesagainst礦dahliaeandBotrytiscinereaonthedoublelayermediumThreemainlypeakgroupswereobtainedbyHPLCanalysis，andonlytheseco

8、ndcompoundhadinhibitoryactivityagainst礦dahliaeandBcinereaThesecondcompoundWasanalysisedbyMALDITOFMSandtwogroupsofhomologues、析t11adifferenceof14DainmolecularweightswereidemifiedInthefirstgroup，therewere4kindsofhomologuesw

9、iththemolecularweightsof1446801，1460813，1474830，1488852Darespectively，whichwereestimatedastheisomerofFengycinA(Cls—ig)Inthesecondgroup，themolecularweightsof5kindsofhomologueswere1462798，1476817，1490839，1504855，1518867Dar

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