PARP1在卵巢癌的表達及抗氧化作用研究.pdf

1、研究背景：卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌列居第三位，但其死亡率卻占各類婦科腫瘤之首，嚴(yán)重威脅女性身體健康。卵巢癌早期一般無臨床癥狀，很難得到早期診斷，70％的患者就診時已為晚期。目前，卵巢癌的治療臨床上主要采用手術(shù)切除和藥物化療聯(lián)合治療，且預(yù)后很差，5年生存率僅30％。由于卵巢癌極高的惡性程度和極低的生存率，因此研究卵巢癌的惡性生物學(xué)行為及其發(fā)病機制就變得極其重要。
　　PARP是存在于多數(shù)真

2、核細(xì)胞中的一種多功能蛋白質(zhì)翻譯后修飾酶，其PAPR1約占90％。當(dāng)DNA損傷時，PARP1可以識別DNA損傷片段并招募DNA修復(fù)蛋白到DNA損傷位點，因此PARP1被認(rèn)為是DNA損傷的感受器。受它修飾的蛋白質(zhì)有組蛋白、RNA聚合酶、DNA聚合酶、DNA連接酶等。PARP1可以對組蛋白進行ADP-核糖基化修飾使組蛋白從染色質(zhì)上脫離下來，從而有助于修復(fù)蛋白結(jié)合進行DNA的損傷修復(fù)。
　　近年來有研究發(fā)現(xiàn)，PARP1在乳腺癌、鼻咽癌、子

3、宮內(nèi)膜癌和肺癌等多種腫瘤中普遍高表達，提示PARP1有可能是腫瘤細(xì)胞生存所必須的，以及PARP1抑制劑用于治療腫瘤的可能性。因此，我們在卵巢癌中檢測了PARP1的表達情況，發(fā)現(xiàn)PARP1在卵巢癌中同樣高表達。為了進一步研究PARP1對卵巢癌細(xì)胞生存所起到的作用，我們用PARP1抑制劑PJ-34及敲除PARP1表達來研究其功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)， PJ-34或敲除PARP1表達都可以抑制卵巢癌細(xì)胞生長。進一步研究發(fā)現(xiàn)PARP1抑制顯著升高了卵巢癌

4、細(xì)胞的ROS水平，同時誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂。而PARP1抑制對卵巢癌細(xì)胞的生長抑制作用可被自由基清除劑NAC所拯救，說明PARP1通過提高卵巢癌細(xì)胞的抗氧化能力對癌細(xì)胞發(fā)揮保護作用。
　　研究目的：研究PARP1在卵巢癌中的表達水平及生物學(xué)作用。
　　研究方法：
　　一、利用Western blot和Real-time PCR技術(shù)檢測PARP1在卵巢癌細(xì)胞和卵巢癌組織中的表達情況。
　　二、利用平板克隆形成實驗檢測

5、PARP1抑制對卵巢癌細(xì)胞的生長抑制作用。
　　三、利用流式細(xì)胞術(shù)檢測PARP1抑制對卵巢癌細(xì)胞ROS水平變化的影響。
　　四、利用平板克隆形成實驗檢測PARP1抑制劑和NAC單獨及聯(lián)合處理對卵巢癌細(xì)胞生長的抑制作用。
　　五、利用免疫熒光和Western blot方法檢測PARP1抑制后，卵巢癌細(xì)胞γ-H2AX的焦點形成及蛋白表達情況。
　　六、利用Real-time PCR檢測PARP1抑制后卵巢癌細(xì)胞氧化損

6、傷相關(guān)基因GPX1、GPX3、PRDX1、NOX4等的表達。
　　實驗結(jié)果：
　　一、PARP1在卵巢癌細(xì)胞A2780、HEY、SKOV3、HO8910、HO8910PM和OVCAR3中高表達，而在正常輸卵管上皮細(xì)胞FTE-187中低表達。PARP1在卵巢癌組織中同樣高表達。
　　二、PJ-34對卵巢癌細(xì)胞A2780、HEY、HO8910具有明顯的增殖抑制作用，而對正常輸卵管上皮細(xì)胞FTE-187影響較小。
　　

7、三、PJ-34誘導(dǎo)A2780、HO8910、HEY、SKOV3等卵巢癌細(xì)胞ROS水平升高。PARP1表達沉默的A2780細(xì)胞ROS水平同樣升高。
　　四、PARP1功能缺陷的卵巢癌細(xì)胞對H2O2和MTH1抑制劑更敏感。抗氧化劑NAC處理卵巢癌細(xì)胞A2780可以拯救PJ-34對卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制作用，說明P J-34對癌細(xì)胞的生長抑制作用是通過升高ROS介導(dǎo)的。
　　五、P J-34處理卵巢癌細(xì)胞A2780可以誘導(dǎo)DNA雙鏈