降脂寧抗氧化作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?冠心病是嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)且發(fā)病年齡日趨年輕化。動(dòng)脈粥樣硬化(arthrosclerosis，As)是冠心病的病理基礎(chǔ)，其防治一直備受關(guān)注，As是一個(gè)慢性病理過程，氧化應(yīng)激在其形成過程中具有重要的作用，其主要機(jī)制是氧化修飾的低密度脂蛋白和氧化應(yīng)激對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，單核細(xì)胞與受損內(nèi)皮黏附并轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞進(jìn)而形成泡沫細(xì)胞，形成動(dòng)脈粥樣硬化的早期病變。臨床和實(shí)驗(yàn)研究都表明降脂寧具有良好的

2、調(diào)節(jié)血脂和抗氧化作用，但機(jī)制未明，因此本研究采用ApoE基因缺陷(apoEgenedeficiency，ApoE-/-)小鼠作為整體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀魏思?xì)胞為體外模型研究降脂寧對(duì)ApoE-/-小鼠As形成和抗氧化的影響，探討其抗氧化的作用機(jī)制，為其后復(fù)方中各效應(yīng)成分抗氧化途徑及中藥防治As提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2.實(shí)驗(yàn)方法 2.1ApoE基因缺陷小鼠雄性44只，8周齡，體重16±2g，隨機(jī)分為4組：模型組、阿托伐他汀組、降脂寧大劑量

3、組、降脂寧小劑量組，灌胃給藥；心臟取血，測(cè)定血清生化指標(biāo)；取主動(dòng)脈根部，HE染色，病理圖像分析系統(tǒng)分析； 2.2采用Wistar大鼠制備含藥血清，過濾除菌； 2.3通過體外低密度脂蛋白氧化為氧化低密度脂蛋白直接抗氧化實(shí)驗(yàn)，探討降脂寧的抗氧化作用； 2.4采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)降脂寧含藥血清對(duì)單核/巨噬細(xì)胞中CD36表達(dá)的影響； 2.5采用流式細(xì)胞儀觀察降脂寧含藥血清對(duì)單核/巨噬細(xì)胞吞噬氧化低密度脂蛋白的影響。

4、 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.1與模型組相比，降脂寧大、小劑量組均可顯著降低ApoE-/-小鼠血清總膽固醇、甘油三酯的水平(均為p＜0.05)； 3.2與模型組相比，降脂寧大、小劑量組均可顯著提高ApoE基因缺陷小鼠血清抗氧化能力、降低丙二醛水平、升高一氧化氮水平(p＜0.01)； 3.3HE染色結(jié)果顯示，與模型組相比，降脂寧高、低劑量組ApoE基因缺陷小鼠主動(dòng)脈根部斑塊程度明顯減輕，主動(dòng)脈斑塊面積/主動(dòng)脈管腔面積

5、顯著縮小(p＜0.001)； 3.4Cu2+誘導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化曲線顯示，與模型組相比，降脂寧含藥血清組吸光度降低，提示該藥具有較好的抗氧化作用； 3.5瓊脂糖電泳顯示，與模型組相比，降脂寧含藥血清組可減慢氧化的低密度脂蛋白的電泳速度，提示其具有抑制氧化低密度脂蛋白遷移的作用； 3.6流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，與模型組相比，降脂寧含藥血清組CD36的表達(dá)降低，提示該藥具有抑制清道夫受體CD36表達(dá)的作用； 3

6、.7流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，與模型組相比，降脂寧含藥血清組可降低單核/巨噬細(xì)胞對(duì)氧化低密度脂蛋白的吞噬作用，提示該藥具有抑制單核/巨噬細(xì)胞吞噬氧化低密度脂蛋白的作用。 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)論 降脂寧具有較好的抗ApoE基因缺陷小鼠主動(dòng)脈粥樣硬化的形成、具有顯著減低主動(dòng)脈斑塊面積/主動(dòng)脈管腔面積、并有較強(qiáng)的抗血清氧化能力的作用；體外實(shí)驗(yàn)表明，降脂寧含藥血清具有抑制氧化低密度脂蛋白遷移速度、降低Cu2+誘導(dǎo)的低密度脂蛋白吸光度、抑制單核/