大鼠發(fā)育期根端復(fù)合體的組織學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)正常發(fā)育情況下SD大鼠牙根的組織學(xué)形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，了解 SD大鼠牙根發(fā)育過(guò)程的各個(gè)階段發(fā)育期根端復(fù)合體的組織學(xué)狀態(tài)，確定 SD大鼠牙根發(fā)育過(guò)程的組織學(xué)時(shí)序性，探究發(fā)育期根端復(fù)合體與牙根發(fā)育過(guò)程的各階段組織學(xué)變化之間的關(guān)系。
　　方法：
　　不同性別的SD大鼠都將被使用，我們將出生當(dāng)天設(shè)計(jì)為“0”天。分別選取出生后3、5、7、9、11、13、17、21、25天的SD大鼠，用頸部脫臼的方式處死

2、 SD大鼠，75％乙醇浸泡5min，將 SD大鼠固定于超凈工作臺(tái)上。用眼科剪沿 SD大鼠口角處切斷上下頜骨，完整分離SD大鼠下頜骨，去除舌體及周?chē)嘤嘟M織。
　　一、HE染色：
　　將下頜骨組織放置于4%的多聚甲醛中固定過(guò)夜，10%的EDTA-2Na脫鈣2周，梯級(jí)乙醇脫水，二甲苯透明石蠟包埋，沿下頜第一磨牙近遠(yuǎn)中方向做連續(xù)5μm切片，切片行 HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察其組織學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　二、免疫組織化學(xué)染色
　　

3、切片常規(guī)脫蠟至水，緩沖液洗3min/2次。將切片放于Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分鐘，PBS緩沖液洗5min/2次，滴加Ultra v block，室溫下孵育5min，緩沖液沖洗5min/2次，滴加兔抗鼠CK14抗體37℃孵育2小時(shí)，緩沖液洗5min/2次，滴加增強(qiáng)子，室溫下孵育20分鐘，緩沖液洗5min/2次，向1ml DAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromog

4、en,混勻后滴加到切片上,孵育15分鐘，自來(lái)水反復(fù)沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。兔抗鼠CK14抗體由Abclonal公司提供。
　　結(jié)果：
　　出生后3d，SD大鼠下頜第一磨牙牙冠尚未完全形成，冠邊緣處尚無(wú)硬組織形成，成釉器在牙頸部縮窄，尚未觀察到HERS結(jié)構(gòu)形成。出生后5d，牙冠繼續(xù)發(fā)育，頸部縮窄，尚未觀察到明顯的HERS結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。出生后7d，牙冠形態(tài)已經(jīng)基本形成，牙頸部縮窄，內(nèi)釉上皮細(xì)胞和外釉上皮細(xì)胞在牙頸部增值，此時(shí)可

5、以觀察到明顯的赫特維希上皮根鞘（HERS）結(jié)構(gòu)形成,HERS向內(nèi)彎曲，并向根尖方向延長(zhǎng)，HERS結(jié)構(gòu)將牙囊和牙乳頭這兩種間充質(zhì)組織分隔開(kāi)來(lái)。出生后9d，牙冠形態(tài)已經(jīng)完全形成，冠部牙釉質(zhì)及牙本質(zhì)厚度持續(xù)增加，免疫組織化學(xué)染色提示 HERS繼續(xù)向未來(lái)根尖孔方向延伸，HERS保持完整性，牙冠邊緣尚未見(jiàn)根部牙本質(zhì)及牙骨質(zhì)形成。出生后11d，在牙冠邊緣可以看到根部牙本質(zhì)形成，HERS依然保持它的基本長(zhǎng)度及完整性，但根部牙本質(zhì)表面尚未見(jiàn)明顯牙骨質(zhì)形

6、成。出生后13天,HERS依然保持其基本長(zhǎng)度，但部分 HERS已發(fā)生斷裂，根部牙本質(zhì)的表面可見(jiàn)少許牙骨質(zhì)形成，根尖方向的細(xì)胞相對(duì)于冠部牙髓更為密集。出生后17天，HERS繼續(xù)發(fā)生斷裂，根部牙本質(zhì)已經(jīng)到達(dá)接近一半左右的牙根全長(zhǎng)，并持續(xù)增厚，無(wú)細(xì)胞牙骨質(zhì)形成于根部牙本質(zhì)表面，根尖孔尚未閉合。出生后21d，牙齒初萌，根部牙本質(zhì)持續(xù)增厚，牙根也繼續(xù)延長(zhǎng)，HERS已經(jīng)發(fā)生斷裂，僅有在根尖處保留部分完整HERS.出生后25d，牙冠已明顯萌出，牙根繼

7、續(xù)延伸，根尖孔仍未完全封閉，成牙本質(zhì)細(xì)胞呈柱狀，根部牙本質(zhì)表面可以觀察到細(xì)胞牙骨質(zhì)和無(wú)細(xì)胞牙骨質(zhì)形成，HERS已完全斷裂，根尖處細(xì)胞濃聚，反應(yīng)根尖處細(xì)胞的高活性狀態(tài)。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)性的對(duì)正常大鼠牙根發(fā)育狀態(tài)下發(fā)育期根端復(fù)合體的組織形態(tài)學(xué)變化進(jìn)行觀察，明確了大鼠牙根發(fā)育的組織學(xué)時(shí)序特點(diǎn)，初步確定了發(fā)育期根端復(fù)合體與牙根發(fā)育的各階段組織學(xué)變化之間的關(guān)系。
　　2.大鼠牙根的組織形態(tài)與人牙根組織形態(tài)在一定程