化痰清熱活血方及其拆方調節(jié)人肺腺癌細胞GLC-82 PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信號轉導的研究.pdf

1、目的:通過觀察化痰清熱活血方(以下簡稱W)及其三個拆方化痰方(以下簡稱Ht)、清熱方(以下簡稱Q)、活血方(以下簡稱Hx)對人肺腺癌細胞GLC-82增殖的抑制和血小板衍生生長因子α(platelet derived growth factor receptorα,PDGFRα)-磷脂酶Cγ1(phospholipase,PLC-γ1)-蛋白激酶Cα(protein kinaseC,PKCα)信號轉導通路的影響,研究化痰、清熱、活血三法治

2、療肺癌的機理,探討痰濁、瘀血、熱毒與肺癌病變和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信號轉導的關系。
　　方法:采用人肺腺癌細胞GLC-82為實驗對象,倒置顯微鏡下觀察細胞的生長情況,計算出藥物對細胞作用的抑制率,篩選出有效的藥物;用正交實驗設計選出療效最好的方劑;用化痰清熱活血方及其拆方處理細胞,均與空白組對照,顯微鏡下觀察細胞GLC-82生長狀態(tài)及形態(tài)改變,用Westernblot檢測各治法組對細胞GLC-82中PDGFRα-P

3、LC-γ1-PKCα信號轉導通路中各蛋白表達的影響。
　　結果:1.化痰清熱活血方及其三個拆方對細胞GLC-82的增殖明顯抑制,各治法組對細胞形態(tài)的作用明顯不同:化痰組細胞可見細胞表面粗糙,細胞變圓、縮小,停止生長,有少量細胞碎片;活血組可見細胞形態(tài)皺縮,變圓,透光度減低,形態(tài)不規(guī)則,貼壁性變差,細胞碎片增多;清熱組細胞可見細胞變成圓球形,細胞間隙變大,胞質粗糙,可見有較多的細胞碎片;全方組細胞表面粗糙,多數細胞呈空泡樣結構,有大

4、量的細胞碎片。2.化痰清熱活血方及其拆方均能抑制細胞GLC-82的生長,全方組抑制作用最強,抑制率隨藥物濃度、時間的增加而增高,對細胞生長的抑制呈現劑量-效應和時間-效應依賴關系。3.人肺腺癌細胞GLC-82可檢測到PDGFRα、PLC-γ1、PKCα蛋白分子的超量表達。4用IC50藥物濃度作用細胞時,化痰清熱活血方及其拆方均能調節(jié)PDGFRα、PLC-γ1、PKCα信號通路各個蛋白表達水平。
　　結論:1.化痰清熱活血方及其三個

5、拆方對人肺腺癌細胞GLC-82的生長均有抑制作用,全方組效果最好,化痰、清熱、活血三法具有協(xié)同效應。2.化痰清熱活血方及其拆方均能降低GLC-82細胞PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信號通路各蛋白表達的水平,化痰清熱活血方及其拆方抑制肺腺癌細胞的增殖與抑制PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信號轉導相關。3.肺腺癌的發(fā)病和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα轉導通路信號增強關系密切。4通過藥效反證,證實在肺腺癌病變中,痰濁、熱毒、瘀